[发明专利]用于细胞识别与分离的抗体－金壳铁核磁纳米粒子合成方法

摘要

本发明提供用于细胞识别与分离的抗体－金壳铁核磁纳米粒子合成方法。用肽链表面修饰法使肽链稳定包裹磁纳米粒子，结合表皮生长因子受体抗体与特定肿瘤细胞膜中过表达的表皮生长因子受体相互作用，实现细胞识别。几乎所有特定的肿瘤细胞都被金纳米粒子覆盖，呈现出紫红色。在磁场作用下实现正常细胞与肿瘤细胞分离，分离效果达到90％。与细胞载体传统检测手段的电子显微镜、荧光显微镜等相比较，抗体－磁纳米粒子与细胞作用可由普通光学显微镜观察。样品不需预处理，细胞种类可根据颜色判断；纳米粒子显色性稳定，不会淬灭的性质可使检测样品长时间保存，并且纳米粒子表面表皮生长因子受体抗体的含量可以通过反应液中物质的配比调控。

主权项

1、用于细胞识别与分离的抗体-金壳铁核磁纳米粒子合成方法，其特征在于步骤和条件为：按照Lyon方法，先利用10毫升浓度为3.0摩尔/升的氢氧化钠与10毫升浓度均为10毫摩尔/升氯化亚铁和氯化铁混合液相互作用获得四氧化三铁，进一步用10毫升0.02摩尔/升的硝酸在100℃下反应1小时获得三氧化二铁，冷却，在室温下将10毫升溶液含有质量浓度为1％氯金酸，5毫摩尔/升的柠檬酸钠和0.2摩尔/升的盐酸羟氨的混合液分10次，每次间隔10分钟加入所制备的三氧化二铁溶液，获得金壳铁核磁性纳米粒子；将多肽胱氨酰丙氨酰亮氨酰天门冬氨酰天门冬氨酰甘氨酰赖氨酰-生物素-甘氨酸与金壳铁核磁性纳米粒子按摩尔比1×105至5×106的配比范围配制成水溶液，在室温下静置反应1小时后，10000rpm离心后抛弃上清液，获得多肽修饰的金壳铁核磁性纳米粒子；配制亲和素修饰表皮生长因子受体抗体和亲和素修饰的蛋白A摩尔比为1∶0.111-99.9的混合物，将多肽修饰的金壳铁核磁性纳米粒子与亲和素修饰表皮生长因子受体抗体和亲和素修饰的蛋白A的混合物，按摩尔比为1∶1×103-5×104配制成pH值为7的磷酸缓冲溶液，在室温下静置反应1小时后，10000rpm离心后抛弃上清液，再加入1000微升pH值为7磷酸缓冲溶液，获得表皮生长因子受体抗体-磁纳米粒子溶液，再10000rpm离心后抛弃上清液，真空冻干，获得用于细胞识别与分离的抗体-金壳铁核磁纳米粒子。