[发明专利]一种农杆菌介导的菘蓝转基因方法

摘要

本发明公开了一种农杆菌介导的菘蓝转基因方法，该方法包括如下步骤：(1)将菘蓝种子接种到MS培养基中获得无菌苗外植体；(2)将发根农杆菌接入YEB培养基中，制备所需的菌液；(3)将外植体通过预培养后，浸入已活化的农杆菌菌液中，利用超声波辅助，使外植体与农杆菌充分接触后，取出外植体转入筛选培养基上进行毛状根的诱导培养；(4)将获得的转基因毛状根进行增殖培养。本发明取消了共培养步骤，增加了用含有抗生素的脱菌水清洗外植体，从而使转化外植体的存活率明显增高，转化时间也明显缩短，降低了转化成本；另外由于在用农杆菌浸染外植体时，利用了超声波作辅助，因此提高了转化率。

主权项

1.一种农杆菌介导的菘蓝转基因方法，其特征在于包括下述步骤：将农杆菌划线接种于YEB固体培养基上培养1～2天后，用牙签挑取生长好的单菌落于YEB液体培养基中震荡培养；将菘蓝种子先用无菌水浸泡，再用消洗灵浸泡，然后用无菌水冲洗2～4次，再用1‰的升汞消毒，并在消毒后用无菌水冲洗2～4次，最后用无菌滤纸吸干水分，接种于MS固体培养基中，在光照条件下进行培养；将上述获得的菘蓝无菌苗切成约1～2cm长的外植体，接种于MS固体培养基中预培养12～48小时，然后放入上述制得的农杆菌菌液中，在超声波的辅助下振荡浸泡，使外植体与农杆菌充分接触，取出外植体，用无菌滤纸吸干外植体表面多余的菌液，转入筛选培养基中诱导毛状根，当筛选培养基上出现农杆菌菌斑时，取出外植体先用无菌水冲洗2～4次，再用含有抗生素的脱菌水除菌，然后用无菌滤纸吸干水后，接入新配制的筛选培养基上继续诱导培养，直至产生毛状根；将上述获得的毛状根接入液体增殖培养基中培养，产生大量的毛状根。