[发明专利]通过实时聚合酶链反应探测和同时进行多重量化病原体的方法

摘要

李斯特菌，金黄色葡萄球菌，空肠弯曲菌和/或大肠杆菌O157∶H7的任一组合在一个或多个测试样品中，通过复合扩增反应实时作用于聚合酶链反应的检测和同时进行的多重量化的方法步骤是(a)从试验样品中现场提取DNA；(b)准备病原体的特有反应混合物来检测和量化，这样，该反应混合物包括对于提取的DNA的酶的扩增的必要试剂和对这些病原体的检测和量化的鉴定；(c)通过作用于聚合酶的复合扩增反应，发挥反应混合物；(d)同时确定这些病原体在上述样品或检验样品的存在与否和量化，这个方法有其特殊性：(i)对于DNA酶的扩增，此反应混合物有几对确定序列编号为1和2，序列编号4和5，序列编号7和8，序列编号10和11的寡核苷酸发端及确定序列编号为3，6，9，12的寡核苷酸序列探针；(ii)上述病原体在任何组合的存在与否和量化由一种荧光信号或每个病原体特有的荧光发射决定的。

主权项

1. 对于检测和同时进行的多重量化任何病原体(这些病原体是从由李斯特菌，金黄色葡萄球菌，空肠弯曲菌和大肠杆菌O157：H7组成的小组中选择的)在一个或多个测试样品中，通过复合扩增反应实时作用于聚合酶链反应的方法，包括以下几个步骤：a)现场提取上述样品或试验样品的DNA；b)准备上述病原体的特有反应混合物来检测和量化，该反应混合物包括对于提取的DNA的酶的扩增的必要试剂和对这些病原体的检测和量化的鉴定；c)通过作用于聚合酶的复合扩增反应，增强该混合物的反应；d)同时确定这些病原体在上述样品或检验样品的存在与否和量化；其中：i)该反应混合物对于提取的DNA酶的扩增和任何李斯特菌，金黄色葡萄球菌，空肠弯曲菌和/或大肠杆菌O157：H7的组合的检测和量化包括：第一对寡核苷酸序列确定为标识符编号1和编号2，探针确定为顺序编号3，这些是越过或捆绑第一个目标的核酸序列的李斯特杆菌；第二对寡核苷酸序列确定为标识符编号4和编号5，探针确定为顺序编号6，这些是越过或捆绑第二个目标的核酸序列的金黄色葡萄球菌；第三对寡核苷酸序列确定为标识符编号7和编号8，探针确定为顺序编号9，这些是越过或捆绑第三个目标的核酸序列的空肠弯曲菌；第四对寡核苷酸序列确定为标识符编号10和编号11，探针确定为顺序编号12，这些是越过或捆绑第四个目标的核酸序列的大肠杆菌O157：H7；ii)这些病原体在上述样品或检验样品中的李斯特菌，金黄色葡萄球菌，空肠弯曲菌和大肠杆菌O157：H7的任一组合的存在与否和量化是由一种荧光信号或每个病原体特有荧光的发射决定的。