[发明专利]缺氧诱导真核基因表达载体及其用途

摘要

本发明公开了一种缺氧诱导真核基因表达载体及其用途。所述发明对pcDNA3.1进行了改造，将其增强子用缺氧诱导的增强子替代，构建了缺氧诱导基因表达载体；为了检测缺氧诱导基因表达载体的功能，将hVEGF₁₆₅的cDNA插入到载体中，构建了含hVEGF₁₆₅的缺氧诱导真核基因表达载体p6HRE-hVEGF₁₆₅，并将该载体转入BHK细胞中，用免疫组化的方法检测hVEGF₁₆₅，证明将该载体可表达外源基因；表达hVEGF的BHK细胞在缺氧环境下培养，用ELISA的方法检测培养上清液中hVEGF的含量，结果证明缺氧诱导后hVEGF的表达量增加；将p6HRE-hVEGF₁₆₅用于家兔肢体缺血性疾病的基因治疗，可有效地促进患肢新生血管和侧支循环的形成，使患肢胫动脉压恢复。本发明可用于缺血性疾病的基因治疗和肿瘤的基因治疗，它不仅为探索缺血性疾病的基因治疗提供了基础，还为其他与缺氧有关疾病及肿瘤的基因治疗开辟了新的途径。

主权项

1、一种缺氧诱导真核基因表达载体，其特征在于：所述发明对pcDNA3.1进行了改造，将其增强子用缺氧诱导的增强子替代，构建了缺氧诱导基因表达载体；为了检测缺氧诱导基因表达载体的功能，将hVEGF165的cDNA插入到载体中，构建了含hVEGF165的缺氧诱导真核基因表达载体p6HRE-hVEGF165，并将该载体转入BHK细胞中，用免疫组化的方法检测hVEGF165，证明将该载体可表达外源基因；表达VEGF的BHK细胞在缺氧环境下培养，用ELISA的方法检测培养上清液中VEGF的含量，结果证明缺氧诱导后VEGF的表达量增加。