[发明专利]“一管法”乙肝病毒核酸提取与扩增－荧光PCR定量技术

摘要

本发明采用申请人发明的微量核酸释放剂，实现在同一管中直接进行乙肝病毒核酸提取和荧光扩增，从根本上解决了多步骤核酸提取法带来的核酸丢失和污染问题，并首次适用于全血标本的荧光PCR检测；采用已定量的原病毒血清作为定量标准品，实现标准品对标本的全程监控；采用双对正反向引物和正反向两条荧光修饰的探针进行荧光PCR扩增，进一步提升其敏感性和扩增效率；引入蓝色的促荧光剂，使配制后的PCR工作液呈浅蓝色，在不影响荧光检测的同时，具有稳定荧光信号、增强扩增效率等作用；设定两段温度梯度程序，采用后段荧光采集法，方便分析并提高仪器的使用寿命；以上技术较传统方法具有革命性创新。

主权项

1.采用带有指示和变色功能的“微量核酸释放剂”，实现在同一管内直接进行核酸提取与荧光PCR扩增：微量血清与蓝色微量核酸释放剂在荧光PCR内混匀，蓝色微量核酸释放剂即变成无色，覆盖灭菌液体石蜡油经“85℃，30s→99℃，7min→5℃，30s”温处理后，直接加入荧光PCR工作液，即可进行荧光PCR扩增和分析结果。操作简捷、快速、无污染。