[发明专利]温郁金脱毒及快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种温郁金的脱毒及组培快速繁殖方法。包括外植体的选取与处理，诱导培养、再生植株的病毒鉴定、增殖培养、移栽等步骤。本发明以MS培养基为基础，加入植物生长调节剂：6－苄基腺嘌呤、激动素、α－柰乙酸、硫酸腺嘌呤等用于温郁金顶端分生组织的诱导培养及丛生芽的增殖和生根两个关键阶段。采用本发明所提供的成套技术方法对温郁金进行组织培养和快繁，解决了温郁金因营养繁殖所造成的病毒积累，品质下降，产量降低的难题，达到了繁殖系数高，技术稳定的要求。可以为温郁金的工厂化生产提供一种周期短、繁殖率高、成本低廉的育苗方法。

主权项

1.一种温郁金的脱毒及快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：1)将温郁金根状茎放在温度36～38℃下4～5周，取出根状茎，用400～500倍百菌清浸泡30～40分钟后，置于底部打若干小洞的塑料周转箱中，以细沙铺底和覆盖，浇透水，将周转箱置于23～27℃温室下催芽培养20～25天，定期喷水，待培育的芽长至1～2公分时，选用顶芽及腋芽流水冲洗30～40分钟后，置于75％酒精中处理20～30秒，然后用0.1％HgCl2灭菌处理6～10分钟后用无菌水冲洗3～5次后用于茎尖的剥离与接种；2)将灭菌后1～2公分顶芽或腋芽，在40倍体视显微镜下剥离茎尖生长点，带一个叶原基，切为0.1～0.2毫米见方的小块，接种于诱导培养基中进行诱导培养，诱导培养基为：MS+BA2.0mg/l+NAA0.5mg/l、MS+BA2.0mg/l+NAA1.0mg/l、MS+BA2.0mg/l+NAA0.5mg/L+AdS30mg/l或MS+KT2.0mg/l+NAA 1.0mg/L；3)采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒，反应结果用连续波长生物测读仪于405nm处读取OD值，烟草花叶病毒的阳性对照采用确定含烟草花叶病毒的烟草新鲜叶，阴性对照采用健康烟草；黄瓜花叶病毒的阳性对照采用确定含黄瓜花叶病毒的黄瓜新鲜叶组织，阴性对照采用健康黄瓜叶片；样品OD405值/阴性对照OD405值明显≥2，判为阳性；样品OD405值/阴性对照OD405值明显＜2，判为阴性，样品的OD405值用SPSS数据处理系统进行分析；4)将生长于诱导培养基上经过病毒检测确定为无病毒的植株转接于增殖培养基上，增殖培养基为：MS+BA1mg/l、MS+BA2mg/l、MS+BA1mg/l+NAA0.2mg/l。5)在增殖培养基上植株一步成苗，移栽到珍珠岩∶灭菌菜园土∶草炭土为1∶1～2∶0.5～1的混合基质上。