[发明专利]人端粒酶基因转导骨髓间充质干细胞的方法无效
| 申请号： | 200710068218.0 | 申请日： | 2007-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN101063150A | 公开（公告）日： | 2007-10-31 |
| 发明（设计）人： | 王金福;黄国平 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/52 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供一种人端粒酶基因转导骨髓间充质干细胞的方法：将pGRN145质粒用Hpa I和Not I限制性内切酶酶切，得到hTERT cDNA片段，并与采用相同限制性内切酶酶切的pLXSN载体相连，构建pLXSN－hTERT重组表达载体；用LipofectAMINE脂质体转导试剂盒通过兼噬性包装细胞系PA317制备pLXSN－hTERT重组表达载体悬浮液后，对人骨髓间充质干细胞进行转导，构建高效表达外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞；用低浓度的潮霉素进行双重筛选人骨髓间充质干细胞。本发明对人骨髓间充质干细胞转导人端粒酶基因，提高细胞中这种蛋白的表达水平，达到提高骨髓间充质干细胞的生命周期的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 端粒 基因 转导 骨髓 间充质 干细胞 方法 | ||
【主权项】：
1.一种人端粒酶基因转导骨髓间充质干细胞的方法，其特征是通过以下方案实现：(1)构建pLXSN-hTERT重组表达载体，将pGRN145质粒用Hpa I和NotI限制性内切酶酶切，经琼脂凝胶电泳分离提纯得到hTERT cDNA片段，并与采用相同限制性内切酶酶切的pLXSN载体相连，构建成pLXSN-hTERT重组表达载体；(2)构建高效表达外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞，依据LipofectAMINE脂质体转导试剂盒指导说明书，通过兼噬性包装细胞系PA317制备pLXSN-hTERT重组表达载体悬浮液后，在1，5-二甲基-1，5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物辅助下对人骨髓间充质干细胞进行8小时的pLXSN-hTERT表达载体转导，构建高效表达外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞；(3)采用低浓度的潮霉素进行双重筛选转导外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞。
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