[发明专利]高粱成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立的方法

摘要

本发明涉及一种高粱成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立的方法，步骤如下：(1)成熟胚愈伤组织诱导培养；将种子剥壳依次用75％酒精浸泡0.5－1min，5－20％次氯酸钠消毒20－50min、0.1％升汞消毒10－20min，再用无菌水冲洗4－5次，晾干后接种于诱导培养基中；光照8－12h，黑暗12－16h，温度22－30℃；(2)愈伤组织继代培养；光照8－12h，黑暗12－16h，温度22－30℃；(3)分化培养；将经过继代培养之后得到的块状、致密的愈伤组织在分化培养基中诱导胚状体的形成和幼苗分化；每日光强3000－4000Lx、光照10－16h，相对湿度为50－70％；(4)生根培养；将从分化培养基分化出的再生植株长到5－8cm时移入生根培养基进行生根；(5)再生植株的移栽。该方法为利用转基因技术育种奠定良好的基础。

主权项

1.一种高粱成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立的方法，其特征在于实施步骤如下：(1)进行成熟胚愈伤组织诱导培养将种子从颖壳中剥出，挑选无虫蚀、无裂痕、完整的、大小均匀一致的种子，在超净工作台上依次用75％酒精浸泡0.5-1min，5-20％次氯酸钠消毒20-50min、0.1％升汞消毒10-20min，再用无菌水冲洗4-5次，然后用无菌滤纸吸干种子表面的水分，晾干后接种于诱导培养基中；愈伤组织诱导基本培养基为MS，添加外源激素为2，4-D和KT；2，4-D的浓度为1.5-4.0mg/L，KT的浓度为0.0-2.0mg/L，并在诱导培养基中加入0-30mg/L的AgNO3；pH为5.8-6.0；诱导条件为：光照8-12h，黑暗12-16h，温度22-30℃；(2)进行愈伤组织继代培养取诱导的初始淡黄色颗粒状愈伤组织接种在继代培养基中进行继代培养；继代培养基本培养基为MS，添加外源激素为2，4-D，2，4-D的浓度为1.0-4.0mg/L，pH为5.8-6.0；光照8-12h，黑暗12-16h，温度22-30℃；(3)分化培养将经过继代培养之后得到的块状、致密的愈伤组织在分化培养基中诱导胚状体的形成和幼苗分化；分化培养基基本培养基为MS，添加外源激素为IAA、6-BA和KT；IAA的浓度为0.5-4.0mg/L，6-BA的浓度为0.5-2.0mg/L，KT的浓度为0.5-2.0mg/L；培养条件为每日光强3000-4000Lx、光照10-16h，相对湿度为50-70％；(4)生根培养将从分化培养基分化出的再生植株长到5-8cm时移入生根培养基进行生根；生根培养基基本培养基为MS，添加外源激素为IAA、6-BA；IAA的浓度为1.0-4.0mg/L，6-BA的浓度为0.5-2.0mg/L；培养条件为每日光强3000-4000Lx、光照10-16h，相对湿度为50-70％；(5)再生植株的移栽待2-3周根已长粗、长密时，除去瓶盖炼苗5-7天，然后取出，洗净根部残留的培养基，移植到无菌土中进行过渡培养，并逐渐增加光照强度；移栽后的前3天，每天浇一次透水，以后土壤保持一定的湿度，防止小苗烂根；温度白天保持22-28℃适于茎叶生长，夜间维持在16-21℃，有利于根系的生长；1-2周后，植株长出新叶，意味着移栽成活；幼苗长出两片新叶后，再移栽到温室中。