[发明专利]一种交联枯草杆菌蛋白酶晶体的制备方法有效
| 申请号： | 200710025782.4 | 申请日： | 2007-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN101139579A | 公开（公告）日： | 2008-03-12 |
| 发明（设计）人： | 袁方;李锐 | 申请（专利权）人： | 张家港澳洁生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/56 | 分类号： | C12N9/56 |
| 代理公司： | 张家港市高松专利事务所 | 代理人： | 黄春松 |
| 地址： | 215600江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种工艺简单、性能稳定的交联枯草杆菌蛋白酶晶体的制备方法，包括如下步骤：(一)在4～65℃下，将质量浓度为2％～10％的枯草杆菌蛋白酶溶液和质量浓度为10％～30％的盐溶液按体积比1∶1～1∶5的比例混合，搅拌至溶液中有晶体析出；(二)将析出的晶体过滤并用盐溶液洗涤至少4次；(三)将晶体加入盐溶液中，得枯草杆菌蛋白酶晶体悬浊液；(四)将双功能交联剂慢慢加入到晶体悬浊液中，加入量为枯草杆菌蛋白酶晶体重量的1～5倍，搅拌3～16小时；(五)将反应液经过滤或离心得交联枯草杆菌蛋白酶晶体粗品，将得到的粗品先用去离子水洗涤2～8次，再用缓冲液洗涤，直至得到所需的交联枯草杆菌蛋白酶晶体。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 交联 枯草杆菌 蛋白酶 晶体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种交联枯草杆菌蛋白酶晶体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(一)在4～65℃下，将质量浓度为2％～10％的枯草杆菌蛋白酶溶液和质量浓度为10％～30％的盐溶液按体积比1∶1～1∶5的比例混合，在50～1000rpm/min的搅拌速度下，搅拌1小时～8天，溶液中有枯草杆菌蛋白酶晶体析出；(二)在4～30℃下，将析出的晶体过滤，再经盐溶液洗涤至少4次。(三)将洗涤过的晶体加入盐溶液中，搅拌1～3小时，得枯草杆菌蛋白酶晶体悬浊液；(四)在4～45℃，300～1000rpm/min的搅拌速度下，将双功能交联剂慢慢加入枯草杆菌蛋白酶晶体悬浊液中，加入量为枯草杆菌蛋白酶晶体重量的1～5倍，搅拌3～16小时；(五)将反应液经过滤或离心得交联枯草杆菌蛋白酶晶体粗品，将得到的交联枯草杆菌蛋白酶晶体粗品先用去离子水洗涤2～8次，再用缓冲液洗涤，直到洗涤流出液在280nm下的紫外吸收值小于0.5停止洗涤，得到所需的交联枯草杆菌蛋白酶晶体。
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