[发明专利]一种谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子的分离纯化方法

摘要

一种谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子的分离纯化方法，属于生物制品的分离纯化技术领域。本发明采用吸水链霉菌为出发菌株，经液体深层发酵制备的谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子，在经过乙醇沉淀、阳离子交换色谱和疏水色谱之后，得到了电泳纯的谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子溶液，可用于后续的蛋白质测序和性质研究。该方法步骤简单，酶纯度高，是一种简便有效的酶分离纯化方法。

主权项

1.一种谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子的分离纯化方法，其特征是工艺步骤为：(1)乙醇沉淀将吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)WSH03-13的发酵液离心去除菌体后，加入乙醇至终浓度为70％，缓慢搅拌使之完全溶解，并于4℃静置10-20min，10000rpm冷冻离心15-30min，收集蛋白沉淀，将沉淀复溶于适量pH 5.0的HAc-NaAc缓冲液中，制成上样液；(2)阳离子交换色谱采用Fractogel EMD SO3 -阳离子交换柱以pH 5.0的HAc-NaAc缓冲液平衡，将1个柱体积的上样液以0.5-1mL/min的速度加入阳离子交换色谱中，用pH 5.0的含0-1M NaCl梯度的HAc-NaAc缓冲液以同样的速度洗脱至280nm紫外吸收峰为0，谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子的活性部分在梯度洗脱时的第一个出峰，收集活性峰；(3)疏水色谱阳离子交换柱上获得的活性部分用pH 7.0的Tris-HCl缓冲液平衡过夜，Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水柱以10个柱体积含有10％NaCl的pH 7.0的Tris-HCl缓冲液平衡，将1个柱体积的上样液以0.5-1mL/min的速度加入疏水色谱中，用pH 7.0的Tris-HCl缓冲液以同样的速度洗脱至280nm紫外吸收峰为0，再以1个柱体积的去离子水洗脱，收集活性峰，即为所制备的电泳纯谷氨酰胺转胺酶激活蛋白酶抑制因子溶液。