[发明专利]一种高效复性膜蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种高效复性膜蛋白的方法，该方法首先将溶解的包涵体蛋白在疏水层析柱中进行纯化，然后采用分子筛进行脱盐，最后在离子交换层析柱中进行变性剂浓度洗脱及盐浓度梯度洗脱，诱导蛋白逐渐正确折叠复性，恢复其天然活性。整个过程不使用任何小分子添加物(如GSSG，GSH、PDI等分子伴侣等)，降低了成本。该方法具有连续性强、操作简便、成本低廉的特点，通过本法可以获得纯度≥98％高均一性、高活性目标蛋白。

主权项

1.一种高效复性膜蛋白的方法，其特征在于，该方法首先将溶解的包涵体蛋白在疏水层析柱中进行纯化，然后采用分子筛进行脱盐，最后在离子交换层析柱中进行变性剂浓度洗脱及盐浓度梯度洗脱，诱导蛋白逐渐正确折叠复性，恢复其天然活性，其具体步骤包括：(1)疏水层析：a.层析柱平衡：用第一流动相平衡常规疏水层析柱；b.变性蛋白吸附：用含0～0.2M还原剂的第一流动相溶解包涵体蛋白质，然后加入到层析柱中，使其与介质吸附，继续用第一流动相冲洗2～10个柱体积以除去未结合蛋白；c.变性蛋白质洗脱纯化：流动相进行梯度洗脱1～15个柱体积，收集洗脱峰，第二个峰为目标蛋白；(2)凝胶过滤层析：用第二流动相平衡常规凝胶过滤层析介质；上样目标蛋白，收集流出蛋白峰，即为脱盐的蛋白；(3)离子交换层析：a.层析柱平衡：用第三流动相平衡常规离子交换层析介质；b.变性蛋白吸附：脱盐的蛋白流经离子交换层析柱，包涵体蛋白可逆地被吸附在层析介质上，第三流动相冲洗2～10个柱体积以除去未结合蛋白；c.变性蛋白洗脱复性：用第四流动相梯度洗脱1～8个柱体积，使蛋白质解吸并逐渐形成天然结构。