[发明专利]一种高效复性膜蛋白的方法

权利要求书

1.一种高效复性膜蛋白的方法，该方法首先将溶解的包涵体蛋白在疏水层析柱中进行纯化，然后采用分子筛进行脱盐，最后在离子交换层析柱中进行变性剂浓度洗脱及盐浓度梯度洗脱，诱导蛋白逐渐正确折叠复性，恢复其天然活性，其特征在于，所述的膜蛋白为膜蛋白HAb18G，其具体步骤包括：

(1)疏水层析：

a.层析柱平衡：用第一流动相平衡介质为丁基琼脂糖介质、苯基琼脂糖介质或辛基琼脂糖介质的疏水层析柱；

b.变性蛋白吸附：用第一流动相溶解包涵体蛋白质，然后加入到层析柱中，使其与介质吸附，上样流速为1ml/min～3ml/min；继续用第一流动相冲洗2～10个柱体积以除去未结合蛋白；

c.变性蛋白质洗脱纯化：用第二流动相进行梯度洗脱1～15个柱体积，洗脱流速为2ml/min～5ml/min，收集洗脱峰，第二个峰为目标蛋白；

(2)凝胶过滤层析：

用第二流动相平衡G-25，XK26/20凝胶过滤层析柱；上样目标蛋白，恒定流速为4～10ml/min，收集流出蛋白峰，即为脱盐的蛋白；

(3)离子交换层析：

a.层析柱平衡：用第三流动相平衡介质为DEAE Sepharose Fast Flow，XK16/20的离子交换层析柱；

b.变性蛋白吸附：脱盐的蛋白流经离子交换层析柱，包涵体蛋白可逆地被吸附在层析介质上，上样流速为1～3ml/min，第三流动相冲洗2～10个柱体积以除去未结合蛋白；

c.变性蛋白洗脱复性：用第四流动相梯度洗脱15个柱体积，洗脱流速为2～5ml/min，使蛋白质解吸并逐渐形成天然结构；

所述的第一流动相为0.02～0.05M Tris～Cl，pH 6.0～9.0，6～8M脲，1.0～2.0M硫酸铵；

第二流动相为0.02～0.05M Tris～Cl，pH 6.0～9.0，含6～8M脲素；

第三流动相为0.02～0.05M Tris～Cl，pH 6.0～9.0，并含6～8M脲素，0.05％Triton X-100；

第四流动相为0.02～0.05M Tris-Cl，pH 6.0～9.0，含0～2M脲素，1M NaCl。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第一流动相还含有含0～0.2M的还原剂，还原剂为含游离巯基的化合物，它们是巯基乙醇、二硫苏糖醇或二硫赤藓糖醇。