[发明专利]检测狂犬病毒的试剂盒

摘要

本发明涉及检测临床样品中狂犬病毒(RABV)存在的方法及试剂盒，特别是涉及以实时定量荧光聚合酶链反应技术早期诊断狂犬病毒感染的方法及所使用的试剂盒。

主权项

1.使用实时荧光定量PCR技术定量检测临床样品中狂犬病毒靶多核苷酸的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：(1)分别装有100μl/管的RNA提取液A、4ml/瓶的RNA提取液B、20μl/管的逆转录酶反应体系、2.0ml/管的经焦碳酸乙二酯处理的纯水、180μl/管的RABV‑PCR扩增反应液I、250μl/管的阴性质控品、200μl/管的RABV强阳性质控品、200μl/管的RABV临界阳性质控品、和各10μl/管的1×10⁶copies/ml、1×10⁷copies/ml、1×10⁸copies/ml、以及1×10⁹copies/ml的RABV阳性定量参考品，并加盖密封的多个试剂瓶或离心管，还包括PCR反应管；(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或离心管的包装盒；其中，RNA提取液A由SiO₂经DEPC水处理后调节pH值为2.0，高压灭菌后4℃保存，RNA提取液B由异硫氰酸胍120g、pH6.4的0.1M Tris‑HCl100ml、pH8.0的0.2M EDTA22ml混合组成，4℃保存，经焦碳酸乙二酯处理的纯水由纯水按1‰的比例加入DEPC溶解混匀，室温放置12小时以上，高压灭菌后4℃保存，逆转录酶反应体系由200U/μl mMLV酶原液、40U/μl RNasin原液用酶稀释缓冲液配制成每微升含有50U mMLV酶、4U RNasin，‑20℃保存，每人份RABV‑PCR扩增反应液I含有40pmol/μl引物PRABV1和40pmol/μl PRABV2各0.05μl、25mM dNTPs 0.4μl、5×RT buffer 4μl组成，总量18μl，‑20℃保存；其中，靶多核苷酸扩增中使用的正向和反向引物分别是5’‑gacatgtttttctcccggattgagca‑3’和5’‑tcttcttcaaagttcttatggaa‑3’，并且其中用于靶多核苷酸扩增和监测的寡核苷酸探针是5’‑gggttcataaagcagatcaatctcactgcgagag‑3’。