[发明专利]单胺氧化酶诊断试剂盒及单胺氧化酶活性浓度的测定方法

摘要

本发明涉及一种酶循环扩增法的单胺氧化酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定单胺氧化酶活性浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、α-酮戊二酸、还原型辅酶、谷氨酸脱氢酶、谷氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合、稳定剂及抗干扰剂；通过一系列的酶促反应，最终将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在400-700nm波长处，测定染料含量的高低，进而直接反映出单胺氧化酶活性浓度的大小。

主权项

1.一种酶循环扩增法(Enzymatic Recycling Method)的单胺氧化酶活性浓度测定方法，其方法原理如下：胺类化合物+2水+氧 单胺氧化酶 相应醛类产物+ 氨离子+过氧化氢+2 OH- 氨离子+α-酮戊二酸+还原型辅酶 谷氨酸脱氧酶 谷氨酸 +辅酶+水谷氨酸+水+氧 谷氨酸氧化酶 氨离子+α-酮戊二酸+ 过氧化氢过氧化氢+还原型色原体组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或 醌亚胺色原+水胺类化合物可以是苄胺、对苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺、5-羟色胺等或其衍生物。将最终反应物置于可见光分析仪下，检测400-700nm处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收速度，得出单胺氧化酶活性浓度大小测定结果。单胺氧化酶(Monoamine Oxidase EC 1.4.3.4、EC 1.4.3.6)作为作用酶，功能为将胺类化合物酶解产生氨。谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC1.4.3.11)作为循环酶，将氨不断地被重复循环利用，并同时不断地扩增产生过氧化氢。过氧化物酶作为显色酶，将过氧化氢与还原型色原体组合作用发生显色反应。