[发明专利]单胺氧化酶诊断试剂盒及单胺氧化酶活性浓度的测定方法

权利要求书

1.一种酶循环扩增法(Enzymatic Recycling Method)的单胺氧化酶活性浓度测定方法，其方法原理如下：

胺类化合物+2水+氧 单胺氧化酶 相应醛类产物+

                      氨离子+过氧化氢+2 OH^-

氨离子+α-酮戊二酸+还原型辅酶 谷氨酸脱氧酶 谷氨酸

                                       +辅酶+水

谷氨酸+水+氧 谷氨酸氧化酶 氨离子+α-酮戊二酸+

                                     过氧化氢

过氧化氢+还原型色原体组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或

                                    醌亚胺色原+水

胺类化合物可以是苄胺、对苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺、5-羟色胺等或其衍生物。

将最终反应物置于可见光分析仪下，检测400-700nm处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收速度，得出单胺氧化酶活性浓度大小测定结果。

单胺氧化酶(Monoamine Oxidase EC 1.4.3.4、EC 1.4.3.6)作为作用酶，功能为将胺类化合物酶解产生氨。

谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3或EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC1.4.3.11)作为循环酶，将氨不断地被重复循环利用，并同时不断地扩增产生过氧化氢。

过氧化物酶作为显色酶，将过氧化氢与还原型色原体组合作用发生显色反应。

2.一种单胺氧化酶诊断试剂盒，主要成分包括：

缓冲液           20-500mmol/L

稳定剂           1-50mmol/L

还原型辅酶       0.1-0.35mmol/L

谷氨酸脱氢酶     2000-500000U/L

谷氨酸氧化酶     2000-500000U/L

α-酮戊二酸      2-20mmol/L

过氧化物酶       500-500000U/L

还原型色原体组合 0.1-20mmol/L

抗干扰剂         1-50mmol/L

其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；

也可以配制成液体试剂，直接使用。

3.根据权利要求2所述单胺氧化酶诊断试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、α-酮戊二酸、还原型辅酶、谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3、EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC 1.4.3.11)、过氧化物酶(EC 1.11.1.7)、还原型色原体组合及抗干扰剂组成单剂试剂。

4.根据权利要求2所述单胺氧化酶诊断试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、α-酮戊二酸、还原型辅酶、谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase EC 1.4.1.2、EC 1.4.1.3、EC 1.4.1.4)、谷氨酸氧化酶(Glutamate oxidase EC 1.4.3.7、EC 1.4.3.11)、过氧化物酶(EC 1.11.1.7)、还原型色原体组合及抗干扰剂组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、α-酮戊二酸、还原型辅酶、还原型色原体组合及抗干扰剂组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、谷氨酸氧化酶、谷氨酸脱氢酶、过氧化物酶及抗干扰剂组成。α-酮戊二酸、还原型辅酶、谷氨酸脱氢酶、谷氨酸氧化酶、过氧化物酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。