[发明专利]提高外源蛋白在转基因植物中累积的方法无效
| 申请号： | 200510030446.X | 申请日： | 2005-10-13 |
| 公开（公告）号： | CN1778932A | 公开（公告）日： | 2006-05-31 |
| 发明（设计）人： | 王彪;武天龙 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66;C12N15/74;A01H1/02;C12P21/02 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 | 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种生物技术领域的提高外源蛋白在转基因植物中累积的方法。包括如下步骤：①用限制性内切酶酶切pCAMBIA2300和pCAMBIA3300质粒和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子hGM－CSF基因，补平，去磷酸化，②用上述同样的方法构建另一种系列的表达载体，③吸取适量农杆菌加入含有抗生素的YEP培养基中，28℃，250rpm培养36hr，④将这两种转基因植株的后代进行杂交，得到杂交的后代；⑤对后代和亲本进行蛋白定量分析。本发明将这两种转基因植物后代杂交，外源蛋白的表达量比亲本提高50％以上。不改变其他的序列，仅在目的基因的末端加上的内质网和液泡导向信号，实现提高外源蛋白在植物中的积累。提高外源蛋白在转基因植物中的累积。达到提高外源蛋白在植物种子中积累的目标。 | ||
| 搜索关键词： | 提高 蛋白 转基因 植物 累积 方法 | ||
【主权项】：
1、一种提高外源蛋白在转基因植物中累积的方法，其特征在于，包括如下步骤：①用限制性内切酶酶切pCAMBIA2300和pCAMBIA3300质粒和人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子hGM-CSF基因，补平，去磷酸化，将hGM-CSF基因和酶切过的载体用T4连接酶连接，过夜，基因的末端有KDEL内质网导向信号，在成熟肽中该短肽能被正确切除；②用上述同样的方法构建另一种系列的表达载体，其特点是hGM-CSF基因的末端有AFVY贮藏液泡导向信号，在成熟肽中该短肽能被正确切除；③将这两种表达载体分别导入农杆菌GV3101和LBA4404中，吸取适量农杆菌加入含有抗生素的YEP培养基中，28℃，250rpm培养36hr，当OD值达到0.8左右，开始用于转化拟南芥和大豆；④将这两种转基因植株的后代进行杂交，得到杂交的后代；⑤对后代和亲本进行蛋白定量分析。
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