[发明专利]提高用毕赤酵母分泌表达成纤维细胞生长因子表达量的方法

摘要

本发明属于一种提高用毕赤酵母分泌表达成纤维细胞生长因子表达量的方法。使用的毕赤酵母工程菌为GS115或KM71，其分泌型表达载体为pPICZα－A，pHIL－S1，pPIC9，或pPIC9K。先将毕赤酵母工程菌在BMGY培养基中培养，再将菌体重悬于复合诱导培养基(BMMAY)开始诱导表达蛋白，BMMAY培养基的组成：甲醇终浓度为0.5－1.5％BMMY培养基，终浓度为0.05－0.1％疏水性氨基酸丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)或蛋氨酸(Met)；诱导温度为：30－31℃；诱导时间：72－144小时；每隔24小时补加诱导剂甲醇及氨基酸，达到诱导时间后离心收获上清液进行分离纯化。

主权项

1.一种提高用毕赤酵母分泌表达成纤维细胞生长因子表达量的方法，首先将分泌型表达载体为pPICZα-A，pHIL-S1，pPIC9，或pPIC9K的毕赤酵母工程菌GS115或KM71，在BMGY培养基中，温度为28-31℃，摇床转数为250-300rpm培养至菌体密度为OD600＝5.0-9.0，培养时间为24-32小时，然后在室温3000-5000rpm离心5-10min，再将菌体重悬于复合诱导培养基开始诱导表达蛋白，复合诱导培养基的组成：甲醇、复合诱导培养基、疏水性氨基酸丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或蛋氨酸；诱导温度为：30-31℃；摇床转数：200-300rpm；诱导时间：72-144小时；每隔24小时补加诱导剂甲醇及氨基酸，使甲醇终浓度为0.5-1.5％，氨基酸终浓度为0.05-0.1％；达到诱导时间后10000-12000rpm离心收获上清液进行分离纯化。