[发明专利]从任意复杂起始材料中分离核酸的制剂和方法以及接下来的染色体组基因分析

权利要求书

1.用于使核酸与固相结合的从任意复杂起始材料中分离核酸，特别是DNA的没有离液序列高的成分的制剂，包括：

--一个含有至少一种反离液序列高的盐成分的溶解/结合缓冲液体系，

--一个固相，

--本文公开的洗涤和洗脱缓冲液。

2.根据权利要求1所述的制剂，其特征在于所述反离液序列高的成分是铵，铯，钠和/或钾盐，优选氯化铵。

3.根据权利要求1或2所述的制剂，其特征在于如果需要，所述溶解/结合缓冲液体系含有去污剂和添加剂。

4.根据权利要求3所述的制剂，其特征在于去污剂和添加剂是tris-HCl，聚乙烯吡咯烷酮，CTAB，tritonX-100，正-月桂基肌氨酸，柠檬酸钠，DTT，SDS和/或Tween。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的制剂，其特征在于溶解/结合缓冲液体系含有用于与固相结合的醇。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的制剂，其特征在于溶解/结合缓冲液体系含有酶，优选降解蛋白质的降解酶。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其特征在于溶解/结合缓冲液体系是水溶液。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其特征在于溶解/结合缓冲液体系是在备好待用的反应器中在贮存中稳定的固体制剂。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的制剂，其特征在于所有载体作为用于利用离液剂分离的固相，优选玻璃纤维簇，玻璃膜，玻璃，沸石，陶瓷，二氧化硅载体。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的制剂，其特征在于具有阴性功能化表面或者可以转化为负电荷势能的功能化表面的所有载体作为固相。

11.根据权利要求10所述的制剂，其特征在于通过酰基，羧基或羟基修饰载体表面。

12.利用根据权利要求1至9中任一项所述的制剂从任意复杂起始材料分离核酸，特别是DNA的方法，其特征在于

溶解起始材料，

使核酸结合固相，

洗涤与载体结合的核酸并且进行核酸的洗脱。

13.根据权利要求12所述的分离核酸的方法，其特征在于含有DNA的材料

--接触包括含有一种反离液序列高的盐成分，至少一种去污剂，如果需要，添加剂和，如果需要，一种蛋白水解酶的水溶液的溶解/结合缓冲液体系，

--接触一种固相，如果需要，该固相中加入乙醇，

--接着洗涤并且将核酸从固相解溶下来。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于起始材料是密集植物材料，例如果实，种子；叶子，针叶等，临床相关样品，例如全血；组织；microbioptates，石蜡包被的材料，ercp-样品，棉签，食品，例如鱼，香肠，罐头，牛奶，法医样品，例如头发根，烟蒂，血迹和其它含有DNA的样品。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其特征在于用于溶解/结合的反离液序列高的盐的离子强度在0.1和8M之间。

16.利用根据权利要求1至8和10至11中任一项所述的制剂从任意复杂起始材料分离核酸，特别是DNA的方法，其特征在于

--起始材料于“单一试管”中或者化学修饰的一步方法中，用阴性功能化表面或可以转化为负电荷势能的表面接触起始材料并溶解，

--进行核酸对表面的结合，

--洗涤结合的核酸，如果需要，洗脱。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于阴性功能化表面是如此修饰的平面表面，过滤膜，传统的塑料容器或微量培养板。

18.根据权利要求16和17所述的方法，其特征在于接着使核酸在相同的反应母液中进行选择的序列片段的扩增反应，如果需要，随即分析基因序列。

19.根据权利要求16和17所述的方法，其特征在于接着使核酸在相同的反应母液中杂交和/或测序。

20.反离液序列高的成分在溶解/结合缓冲液体系中通过使核酸结合固相的分离和纯化核酸的用途。