[发明专利]肠细菌OMPA蛋白在特异导向抗原呈递细胞中的应用

说明书

本发明涉及肠细菌OmpA蛋白，优选肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)P40蛋白，在将与之相连的生物活性物质特异导向抗原呈递细胞、尤其是人树突细胞中的应用。本发明还涉及OmpA蛋白在制备用于预防和/或治疗疾病、尤其是与肿瘤抗原相关的癌症、自身免疫疾病或感染性疾病的药物组合物中的应用。

疫苗接种是一种预防或减弱病毒或细菌感染的有效方法。在该领域中接种运动的成功使疫苗的概念可以延伸到其它领域，例如癌症和自身免疫病的领域。例如，对于某些形式的癌症而言，常规治疗例如化疗或放疗的无效和/或其副作用促使了对其它治疗方法的寻找。因此，可使用肿瘤细胞表面表达的特异肿瘤抗原作为免疫治疗以清除这些细胞的靶点。通常在制备这些疫苗时面临的一个主要问题是，当单独给宿主施用这些疫苗时，疫苗抗原的免疫原性不足以诱导可有效地赋予所期望保护的免疫应答。因此通常这些抗原与载体分子共价偶联，这些载体分子为例如白喉毒素表位、破伤风类毒素(TT)、乙肝病毒表面抗原、脊髓灰质炎病毒的VP1抗原或任何其它毒素，或病毒或细菌的抗原如来源于肠细菌外膜的抗原蛋白，这些抗原蛋白具有加强对与之相连的抗原的(体液或细胞)免疫应答的特性，例如来源于肺炎克雷伯氏菌称作P40的OmpA蛋白(描述于国际专利申请WO95/27787和WO 96/14415)。然而，在大多数情况中，已证实为了增加疫苗的有效性另一种成分是必需的，而且目前批准使用于人的唯一佐剂是明矾。

通过免疫学研究，最近发现树突细胞在免疫系统中扮演着一个主要角色。来源于骨髓干细胞的这些细胞是专业性的抗原呈递细胞，参与抗原特异的初次免疫应答(Peters J.等，1996)。它们吞噬或内化抗原并将这些抗原的片段呈递给未刺激过的T细胞。该吞噬在树突细胞表面诱导共刺激分子如CD80和CD86的表达。这些分子使得可以和T细胞发生紧密相互作用(Girolomoni G.和Ricciardi-Castagnoli P.，1997，Immunol.Today，18，102-104)。树突细胞广泛分布在各种组织中。发现这些细胞存在于皮肤和淋巴结器官中(Hinrich J.等，1996，Immunol.Today，17，273-277)。

由于其在呈递抗原和刺激免疫系统方面的有效性，树突细胞已被用于产生抗病毒的(Ludewig B.等，1998，病毒学杂志(J.Virol.)，72，3812-3818；Brossard P.等，1997，免疫学杂志(J.Immunol.)，158，3270-3276)或抗癌的(Nestle F.O.等，1998，Nat.Med.，4，328-332)细胞毒性CTL应答。具体方法包括用目的抗原(肽或细胞裂解物)装载离体的树突细胞，并将这些细胞重新植入患者体内。其它方法包括用编码目的抗原的基因转染离体的树突细胞，并将这些转染细胞重新注入体内(Gilboa E.等，1998，癌症免疫学与免疫治疗(Cancer Immunol.Immunother.)，46，82-87)。这些方法已成功用于小鼠，并且最近已用于人(Hsu F.J.等，1996，Nat.Med.，2，52-58)。装载了抗原的树突细胞通过I类或II类分子呈递肽，并诱导CD4或CD8+T淋巴细胞的激活。因此，如果能使所选抗原如蛋白或多糖，或可转移编码这些抗原的基因的病毒载体指向树突细胞，则将可以改善免疫系统刺激的有效性。此外，抗原呈递细胞(APC)，尤其是树突细胞的特异导向将使得可以省去如下步骤：含有肿瘤抗原或病毒载体的自体或异体APC的取出、纯化和体外处理，以及处理后APC的重新植入。

为了特异地导向含有目的活性物质如蛋白或可转移这些目的蛋白编码基因的病毒载体的树突细胞，进行了许多研究，包括鉴定优先与树突细胞结合的分子，或在树突细胞上特异性表达的受体。已在鼠(Jiang W.等，1995，自然(Nature)，375，151-155)和人(Kato M.等，1998，免疫遗传学(Immunogenetics)，47，442-450)的树突细胞上鉴定了抗原装载中涉及的受体DEC 205。该受体的结构分析揭示了被认为参与了携带糖残基的抗原的捕获、内化和/或呈递的糖识别结构域。然而，作者未给出该受体可结合的配体的任何信息。另一方面，作者提及，受体DEC-205的这些被认为参与抗原捕获、内化和/或呈递的糖识别结构域(富含半胱氨酸的结构域)也存在于50多种蛋白包括一些细胞受体中。