[发明专利]含有与水不溶性底物结合的取代枯草杆菌蛋白酶的个人护理组合物

说明书

                       技术领域

本发明涉及含有与擦拭底物结合的单一取代枯草杆菌蛋白酶的个人护理组合物。所述个人护理组合物的实施方案包括个人护理用擦物和个人护肤用遮盖剂。本发明的组合物提供改进的清洁和皮肤调理作用，这归因于活性蛋白的活性，同时减小了使用者对活性蛋白产生变应性反应的危险性。

                       发明背景

越来越多的含活性蛋白的市售产品为人们采用。绝大多数此类产品使用了酶作为活性蛋白质。酶是与化合物或底物反应使该化合物分解的蛋白质。基于与其反应的底物的种类，酶被分为多种类型。各种酶一般可催化不同化学键的断裂，产生特异性选择的活性。已知脂肪酶能够水解在烃类和多元醇主链底物之间生成的(但不限于此)酯键。这些底物的实例是甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯聚甘油酯。蛋白酶类的酶能够水解蛋白。将天然和生物工程的蛋白酶掺混在家用清洁洗涤剂中可用来水解蛋白类灰尘和污渍，混合在个人护理产品中用来除去污物和死皮，混合在口腔清洁产品中用来去除口腔中的牙斑，而且可混合在药物中用来影响体内的有害蛋白质。

公认在普通市售清洁产品中掺入蛋白酶可以使产品更加有效。美国专利号4261868(Hora等人)、美国专利号4404115(Tai)、美国专利号4318818(Letton等人)、欧洲专利申请130756(1985.1.9公开)和美国专利5030378(Venegas)都公开了蛋白酶在清洁或洗涤产品中的应用。

然而，人们还认识到，许多包括酶在内的活性蛋白是潜在抗原，而抗原在人体中的某些条件下可引起变态反应。人体免疫系统可在暴露于活性蛋白时产生特异性抗体。当临床上获得有益应答时这种产生特异性抗体的过程被称作“免疫”。但是，当这样的反应导致过敏症时，其被称作“致敏”。已在人体定期暴露于蛋白的环境中观察到对活性蛋白的变态反应。所述环境包括：制造厂，工人可能暴露在未受控制的、含有活性蛋白的尘土或悬浮微粒；或市场，在那里消费者反复使用含有活性蛋白的产品；有时会引起变态反应。

目前，通过限制那些用于人体的产品中所选择的蛋白可以减少对活性蛋白的变态反应。虽然这种途径可以减少变应原性问题，但是无法彻底解决该问题，因为常常无法发现具有预期活性的活性蛋白。

减少变态反应的另一方法是减小蛋白分子的大小(参见日本专利公开号4112753)。然而，减小蛋白的大小也可能导致生物活性明显降低。

减小变应原性的第三种建议是通过表位作图并且改变蛋白氨基酸序列，从而释放出具有低变应原性的蛋白。这种方法一般需要花费大量的研制时间和费用。

在医药领域，人们建议通过另一种方法减小蛋白的免疫原性。这种方法包括将非反应性聚合物附着在蛋白上。美国专利号4179337(Davis等人)涉及了偶联于基本上直链的聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG)聚合物部分的酶。虽然发现PEG/PPG的偶联缓和了酶的变应原性，但仅仅保留下15％的生理活性。PCT申请WO 96/17929(Olsen等人，1996.6.13公开)涉及通过与适当聚合物接合的酶的改性。Olsen的专利中请描述了改性酶，证明这些酶与亲代酶相比变应原性减小了25％至66％，而保留了亲代活性的39％至100％。

美国专利申请序号08/903298公开了通过加入双生(twin)聚乙二醇聚合物部分改性的酶的应用，从而减小变应原性并且传递高的酶活性。其中改性酶与纤维性底物结合用于擦拭用途。改性酶不附着在底物上。经改性的酶减小了变应原性。

美国专利申请序列号09/088912公开了在三个特异性表位区的一个或多个区中枯草杆菌蛋白酶的聚合物化学改性，发现由此可掩蔽该酶的免疫原决定因素。

另一种减小活性蛋白的变应原性的途径是通过制粒、涂层或溶解活性蛋白来避免它们在空中传播。美国专利4556554(Calvo)公开了含有酶的化妆品组合物，其中通过附着在聚合物载体的颗粒上所述酶得到固定。附着酶的颗粒被分散在化妆品赋形剂中。在将该赋形剂涂敷在皮肤上时，载体释放出酶并且该酶被再次激活。例如这样的方法令使用者暴露于空气传播的蛋白，然而它们仍然存在与大范围组织和所释放酶(这些酶沉积在皮肤上)相接触有关的严重危险性。

加拿大专利1229808(1987年12月1日授权)教导了将酶，尤其是β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶固定在纤维素底物上，其中通过吸附在琼脂糖胶涂层的底物内使酶得到固定。