[发明专利]基因克隆的新方法

权利要求书

1．用于分离膜结合蛋白的编码基因的方法，所述的方法包括如下步骤：

(ⅰ)将包括编码对一种抗原具有结合亲和力的可分泌性功能蛋白的DNA以及连接于该功能蛋白编码DNA 3’侧下游的cDNA的载体引入细胞，

(ⅱ)在细胞内表达对抗原具有结合亲和力的可分泌性功能蛋白与由该cDNA所编码蛋白的融合蛋白，

(ⅲ)通过将在细胞膜上表达融合蛋白的细胞与抗原相接触，筛选结合抗原的细胞，并且

(ⅳ)从所筛选的细胞中分离插入到载体中的cDNA。

2．权利要求1所述的方法，其中通过在功能蛋白编码DNA 3’侧下游的限制性酶切位点处将cDNA引入载体来获得在步骤(ⅰ)中引入细胞的载体。

3．权利要求1所述的方法，其中通过将包括编码功能蛋白的DNA和连接于该功能蛋白编码DNA 3’侧下游的cDNA的DNA引入载体来获得在步骤(ⅰ)中引入细胞的载体，

4．权利要求1至3中任何一个所述的方法，其中通过编码肽连接序列的DNA连接编码功能蛋白的DNA和其3’侧下游的cDNA。

5．权利要求1至4中任何一个所述的方法，其中该cDNA源于哺乳动物细胞的cDNA文库。

6．权利要求1至5中任何一个所述的方法，其中在步骤(ⅰ)中引入细胞的载体在编码功能蛋白的DNA 5’侧的上游包括编码分泌信号序列的DNA。

7．权利要求1至6中任何一个所述的方法，其中该功能蛋白为抗体。

8．权利要求1至7中任何一个所述的方法，其中对抗原具有结合亲和力的功能蛋白为一种单链抗体。

9．权利要求1至8中任何一个所述的方法，其中该载体包括一种DNA，在该DNA中编码抗体恒定区的DNA连接于编码一种单链抗体的DNA 3’侧的下游。

10．权利要求1至9中任何一个所述的方法，其中将该抗原结合于一种支持物。

11．权利要求10所述的方法，其中该支持物用于细胞培养。

12．权利要求1至11中任何一个所述的方法，其包括确定从细胞获得的基因是否包含新的序列。

13．权利要求12所述的方法，其包括筛选cDNA文库以获得由细胞所获基因的全长基因，该基因包括新的序列。

14．权利要求13所述的方法，其包括分离由细胞所获基因的全长基因，该基因包括新的序列。

15．用于分离膜结合蛋白的编码基因的试剂盒，该试剂盒包括具有用于在编码对一种抗原具有结合亲和力的可分泌性功能蛋白的DNA 3’侧下游插入cDNA的限制性酶识别位点的载体。

16．权利要求15所述的试剂盒进一步还包括结合抗原的支持物和/或待引入载体的细胞。