[发明专利]可得自转基因羊的胆汁盐活化的人脂肪酶(BSSL)

权利要求书

1．由转基因非人类哺乳动物产生的重组胆汁盐活化的人脂肪酶，所述脂肪酶至少5％糖基化。

2．按照权利要求1的重组胆汁盐活化的人脂肪酶，其中所述转基因非人类哺乳动物是有胎盘哺乳动物。

3．按照权利要求1的重组胆汁盐活化的人脂肪酶，其中所述转基因非人类哺乳动物是有蹄类哺乳动物。

4．按照权利要求1-3中任一项的重组胆汁盐活化的人脂肪酶，其总单糖含量为10％以上。

5．按照权利要求4的重组人类被子胆汁盐激活的脂肪酶，包含至少1％N-乙酰半乳糖胺。

6．按照权利要求1-5中任一项的重组胆汁盐活化的人脂肪酶，包含下列单糖组成：0-6％岩藻糖，3-12％半乳糖，0.1-2％甘露糖，1-7％N-乙酰半乳糖胺，0.5-15％N-乙酰葡萄糖胺，和1.5-10％5-Ac-神经氨酸。

7．按照权利要求6的重组胆汁盐活化的人脂肪酶，包含下列单糖组成：0-1％岩藻糖，6.5-8.5％半乳糖，1-2％甘露糖，5.5-7％N-乙酰半乳糖胺，3.5-5％N-乙酰葡萄糖胺，和2.5-4％5-Ac-神经氨酸。

8．按照权利要求7的重组胆汁盐活化的人脂肪酶，包含下列单糖组成：7.5％半乳糖，1.5％甘露糖，6.3％N-乙酰半乳糖，4.2％N-乙酰葡萄糖胺，和3.1％5-Ac-神经氨酸。

9．按照权利要求1-8中任一项的重组胆汁盐活化的脂肪酶，其氨基酸序列基本如在序列表中SEQ ID NO:3所公布。

10．按照权利要求1-8中任一项的重组胆汁盐活化的脂肪酶，其氨基酸序列在序列表中公布于SEQ ID NO:4。

11．按照权利要求1-8中任一项的重组胆汁盐活化的脂肪酶，包含功能上由序列表中的SEQ ID NO:3构成的氨基酸序列。

12．按照权利要求1-8中任一项的重组胆汁盐活化的脂肪酶，包含功能上由序列表中的SEQ ID NO:4组成的氨基酸序列。

13．转基因羊，其生殖细胞和体细胞含有重组核苷酸分子，所述重组核苷酸分子是胚胎阶段被导入所述羊或所述羊的祖先；所述的重组核苷酸分子包含(ⅰ)一段编码胆汁盐活化的人脂肪酶的核苷酸序列和(ⅱ)一个有效地连接到编码胆汁盐活化的人脂肪酶的所述核苷酸序列上的启动子。

14．按照权利要求13的转基因羊，其中编码胆汁盐活化的脂肪酶的所述核苷酸序列来自质粒pS452携带的一段核苷酸序列，所述质粒由保藏号DSM7499鉴定。

15．按照权利要求13的转基因羊，其中编码胆汁盐活化的脂肪酶的所述核苷酸序列来自序列表的SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中公布的一段核苷酸序列。

16．按照权利要求13的转基因羊，其中编码胆汁盐活化的脂肪酶的所述核苷酸序列是来自序列表的SEQ ID NO:3或4中公布的、编码多肽的一段核苷酸序列。    

17．按照权利要求13的转基因羊，其中编码胆汁盐活化的脂肪酶的所述核苷酸序列是来自在严格条件下与权利要求15或16中限定的任一序列杂交的一段核苷酸序列。

18．按照权利要求13的转基羊，其中所述启动子是一种乳汁蛋白启动子。

19．按照权利要求18的转基羊，其中所述启动子是β-乳球蛋白启动子。

20．按照权利要求13-19中任一项的雌性转基因羊，其中编码被胆汁活化的脂肪酶的所述核苷酸序列是在所述雌性转基因羊的乳腺中得到表达，并且其中胆汁盐活化的脂肪酶是存在于所述雌性转基因羊的乳汁中。

21．按照权利要求20的雌性转基因羊的产生方法，包括：

(a)提供有效地连接到在羊中有功能的启动子、编码胆汁盐活化的人脂肪酶的基因；

(b)将所述基因导入到羊的胚胎或羊的受精卵中，以便整合所述基因进入到所述羊的生殖系中；

(c)将所述胚胎或受精卵移植入拟妊娠的受体羊；

(d)让所述受体羊繁殖后代；

(e)选择一只在乳汁中产生可回收量的胆汁盐活化的脂肪酶的雌性后代羊。