[发明专利]CD19xCD3特异性多肽及其用途

说明书

本发明涉及新颖多功能多肽，该多肽包括至少两个分别对CD19和CD3抗原特异性的结合位点。本发明还涉及原种多肽，其中所述多肽至少还包括一个功能域，优选为具有预定功能的功能域。另外，本发明还涉及编码所述多肽的多核苷酸以及包括所述多核苷酸的载体、用它们转化的宿主细胞、和它们在产生所述多肽中的作用。另外，本发明还涉及组合物，优选为药物学或诊断组合物，包括任何一种上述多肽、多核苷酸或载体。本发明的另一个目标是上面提到的多肽、多核苷酸和载体制备药物组合物中的用途，这些药物组合物用于免疫治疗，优选为治疗B细胞恶性肿瘤例如非霍奇金淋巴瘤。

本说明书中引用了数篇文献。本文引用的各篇文献(包含任何厂商的说明书、指南等)在此纳入以供参考；然而，并不承认任何所引用的文献真正为本发明的

现有技术。

尽管在医学上很重要，B细胞介导疾病例如非霍奇金淋巴瘤的研究仅产生了少量临床上有用的资料，而治疗这种疾病的常规方法仍是冗长和令人不快的，而且/或具有高复发危险。例如，虽然作为高级非霍奇金淋巴瘤的主要治疗手段的高剂量化疗可以提高总成活率，但大约50％的病人仍死于此病(2-4)。另外，低级非霍奇金样淋巴瘤慢性淋巴白血病和皮层细胞淋巴瘤仍不能治愈。这激发了其它策略例如免疫治疗的研究。针对由CD抗原定义的细胞表面分子的抗体为开发治疗药剂提供了一个独特的机会。某些CD抗原的表达高度限制于特异性淋巴造血细胞谱系，而且在过去数年中，针对淋巴样特异性抗原的抗体已用于开发体外或动物模型中显示有效的治疗手段(5-13)。在这方面CD19已证明是非常有用的目标。CD19在全部B细胞谱系，从前B细胞到成熟B细胞中都有表达，它不脱落，而是均一的在所有淋巴瘤细胞上表达，而且不存在于干细胞中(8,14)。一种感兴趣的治疗方式是采用双特异性抗体：一种特异性针对CD19，另一种针对T细胞的CD3抗原。然而，为了显示令人满意的生物学活性，双特异性抗体由于要忍受低T细胞细胞毒作用和需要共刺激制剂尚不实用。

因此，本发明的关键技术问题是提供用于治疗B细胞介导疾病(例如不同形式的非霍奇金淋巴瘤)的工具和方法。所述技术问题的解决方法可通过本文提供的权利要求描述的实施方案来达到。

因此，本发明涉及一种单链多功能多肽，包括：

(a)第一功能域，它包含免疫球蛋白链或特异性识别CD19抗原的抗体的结合位点；以及

(b)第二功能域，它包含免疫球蛋白链或特异性识别CD3抗原的抗体的结合位点。

本发明的术语“第一功能域”和“第二功能域”指一个结合位点，针对泛B细胞标记CD19,(CD19在绝大多数恶性肿瘤B细胞中都有表达)，另一个结合位点针对人T细胞CD3抗原。

本发明所用的术语“结合位点”表示一功能域，它包含能特异性结合抗原的天然抗体、游离scFv片段或其对应的一种免疫球蛋白链(优选V_H链)的三维结构。因此，所述功能域可包括抗体或免疫球蛋白链的Vx和/或V_L功能域，优选至少包括V_H功能域。另一方面，本发明多肽包含的所述结合位点可包括分别识别CD19和CD3抗原的抗体或免疫球蛋白链的至少一个互补决定区(CDR)。在这方面，应注意本发明多肽中存在结合位点的功能域，可以得自抗体和其它CD19或CD3结合蛋白，例如天然存在的表面受体或配体。按照本发明，所述结合位点包含于功能域中。

本文所用的术语“多功能多肽”表示一种多肽，它包含至少两条不同来源(亦即，两个不同分子，可任选的不同动物)的氨基酸序列，其中至少这两个来源规定了结合位点。因此，所述结合位点确定了所述多功能多肽的功能、至少某些功能。这种多肽包括例如，双特异性单链(bsc)抗体。

本发明使用的术语“单链”指多肽共价连接的第一和第二功能域，优选为一个核酸分子编码的共线性氨基酸序列形式。

CD19表示B细胞谱系(例如在前B细胞和成熟B细胞)中表达的抗原，它不会脱落，而在所有淋巴瘤细胞中都有表达，而且在干细胞中不存在(8,14)。

CD3表示T细胞表达的抗原，它作为多分子T细胞受体复合物的一部分，并且含有三条不同链CD3ε,CD3δ和CD3γ。将CD3簇集于T细胞上(例如通过固定的抗CD3抗体)可导致T细胞活化，这类似于T细胞受体的接合，但不依赖于其克隆的类型特异性。实际上，大多数抗CD3抗体识别的是CD3ε链。