[发明专利]饲料制剂中的热稳定性植酸酶及植物表达

说明书

技术领域

本申请涉及热稳定性植酸酶，也就是说，热稳定性植酸酶在制备动物饲料过程中的应用及其在植物中的表达。

背景技术

WO91／14782描述表达衍生自曲霉属ficuum NRRL3135的植酸酶的转基因烟草和菜籽植物。该转基因烟草种子用于喂食笋鸡。

US 5824779描述如何以标准方式制备表达同样的曲霉属ficuum植酸酶的转基因苜蓿，和本身可作为动物饲料添加剂使用的含有植酸酶浓缩物的制备。

EP 0556883 B1描述基于挤压技术制备饲料球粒的方法。在饲料粒挤出之后进行温度敏感试剂(其中一个实例是植酸酶)的添加，且在减压下将温度敏感试剂装载到球粒上。

EP 0556883 B1中指出，饲料调制过程中热敏感物质活性的损失是众所周知的问题。上述EP专利提出，在挤出过程之后，在减压下加入这些物质来解决这一问题。然而，这种解决方法需要液态形式的温度敏感物质，以及需要配备额外的昂贵的工艺设备。

本发明提供制备动物饲料的改进的方法以及改进的表达植酸酶的转基因植物。

发明概述

本发明提供制备动物饲料的方法，该方法包括饲料成分的团聚，在团聚之前或期间加入热稳定性植酸酶。

本发明也提供含有编码热稳定性植酸酶的DNA-构建体的转基因植物或植物的一部分。

转基因植物或其部分(如种子或叶子)可以用于本发明的饲料配制过程，从而在一优选的实施方案中同时提供养分(饲料成分)和饲料添加剂植酸酶。

附图简述

结合下面的附图，详细描述本发明，其中

图1是共有植酸酶-1和共有植酸酶-10的差示扫描量热图(DSC)；

图2是共有植酸酶-10-热-Q50T和共有植酸酶-10-热-Q50T-K91A的DSC；

图3是共有植酸酶-1-热[8]-Q50T和共有植酸酶-10-热[8]-Q50T-K91A的DSC；

图4是来自烟曲霉ATCC 13073和其α-变株的植酸酶的DSC；和

图5显示共有-植酸酶-1氨基酸序列的设计；

图6是五种担子菌植酸酶的对比和担子菌共有序列；

图7是共有-植酸酶-10氨基酸序列的设计；

图8是为共有-植酸酶-11设计的对比(对于每一个担子菌序列，赋予0．2的权重，所有担子菌植酸酶作为独立序列而被使用；进一步使用黑曲霉T213的氨基酸序列)；

图9是共有植酸酶-1-热(8)-Q50T-K91A的DNA和氨基酸序列；

图10是共有植酸酶-10-热(3)-Q50T-K91A的DNA和氨基酸序列；

图11是烟曲霉ATCC 13073α-变株的DNA和氨基酸序列；和

图12是共有-植酸酶-7的DNA和氨基酸序列，共有植酸酶-7与共有-植酸酶-1相比，包括下列突变：S89D，S92G，A94K，D164S，P201S，G203A，G205S，H212P，G224A，D226T，E255T，D256E，V258T，P265S，Q292H，G300K，Y305H，A314T，S364G，M365I，A397S，S398A，G404A和A405S。

发明详述

本文中，“食物”或“动物饲料”指打算或适宜于由动物吃入、摄入、消化的任何天然或人工饮食、乳品或类似物。人类的食物包括在上述食物的定义中。

“动物”包括所有动物，无论它是多胃动物(反刍动物)还是单胃动物如人类、家禽、猪和鱼类。优选的动物是单胃的动物，特别是猪和笋鸡。

“饲料成分”的概念包括将被或被加工成饲料的原料。非人动物的饲料成分通常是并且优选地选自下列非穷举的物质：

取自植物的产品

如种子、谷粒、叶子、根、块茎、花、豆、皮-它们可以是鳞片状、饼状、渣状、粉状等；

取自动物的产品

如鱼肉、奶粉、骨提取物(extract)、肉类提取物、血液提取物等；

添加剂

如矿物质、维生素、芳香族化合物和饲料增强酶。

植酸或肌醇1，2，3，4，5，6-六磷酸二氢酯(或简称为肌醇六磷酸酯)是肌醇的主要来源并且是植物种子和谷粒中磷酸的主要储存形式。在豆类种子中，其含量占磷酸酯含量的约70％。种子、谷粒和豆是重要的饲料成分。