[发明专利]与佐剂一起注射的重组活疫苗

说明书

本发明涉及一种结合和体内表达一个或多个异源基因的重组活疫苗的改进。特别涉及包含佐剂的这种疫苗，涉及佐剂化合物在这种疫苗应用中的用途以及相关的接种方式。本发明也涉及制备这些疫苗的方法。

结合灭活或亚单位疫苗佐剂来增强对这些疫苗包含的抗原的免疫应答是常规方式。

同样当微生物的减毒导致免疫反应减低时，可以在减毒活疫苗中结合佐剂。

最近，也已提出针对数种病原体联合免疫，其中利用灭活疫苗作为一价和减毒活疫苗作为另一单价。还提出了重建减毒活疫苗，在包含佐剂的灭活疫苗组合物中以冻干形式保存。所说的组合物作为活疫苗的重建载体，而不寻求任何佐剂效果。

EP-A-532 833提出一种抗马鼻肺炎(rhinopneumonia)的疫苗，这种病是由马疱疹病毒(EHV)引起的疾病。该疫苗是一种灭活的包含佐剂的疫苗，由灭活的EHV-4和EHV-1病毒组合，包含基于聚丙烯酸聚合物的Havlogen^佐剂。

对于大部分疱疹病毒，当前没有有效的疫苗来在感染后迅速清除病毒。已知的疫苗尝试对临床症状的出现进行保护。总之，对于病毒排泄的效果有限。

根据EP-A-532 833，据认为所开发的疫苗导致病毒排泄79％到93％的降低(见结果部分)。9个中8个对照动物中在攻击后平均排泄病毒1.4天，而攻击后通常的排泄期为多于或等于5天。这代表低剂量的攻击，接受免疫的马与对照相比人为地增加了保护。本实验中病毒排泄的减少因此并不显著。

聚羧乙烯聚合物(carbomer)类型的佐剂还被用于含灭活病毒的马流感疫苗(IEV)中。

Mumford等(Epidemiol.Infect.(1994)，112，421-437)指出需要两剂量的马流感疫苗诱导产生瞬时的体液免疫和在马中抗病毒的弱保护作用。作者比较了灭活疫苗中加入或不加破伤风类毒素时聚羧乙烯聚合物和磷酸铝的佐剂效果。在所有病例中，针对H7N7和H3N8株，第一次免疫后，利用SRH(单辐射溶血)技术检测到低抗体滴度，需要第二次及第三次免疫来产生较强的瞬时免疫反应。

US-A-4 500 513也在加入聚羧乙烯聚合物的灭活疫苗进行了抗马流感病毒的接种试验。没有精确描述动物的来源及医学状态，可能为田间动物(11拦，第二段)。利用血凝抑制技术检测到较高的抗体滴度，表明试验动物可能已被流感病毒感染，因此免疫后诱导的反应是加强类型，而不是初始免疫类型。

最后，Fort Dodge Solvay推出了聚羧乙烯聚合物佐剂中的灭活马流感疫苗(Duvaxyn^IE和IE-T plus)和灭活马鼻肺炎疫苗(Duvaxyn^EHV_1，4)。

包含氢氧化铝佐剂的抗马流感的商业灭活疫苗(例如Tetagripiffa^，Merial，Lyons，法国)也已知。

大量的其他佐剂用于常规商业灭活或亚单位疫苗。可以提到例如，氢氧化铝，磷酸铝，Avridine^，DDA，单磷酰基脂A，Pluronic L121和其他的嵌段聚合物，胞壁酰肽，皂苷，海藻糖二霉菌酸酯，马来酐和乙烯的共聚物，苯乙烯和丙烯酸或甲基丙烯酸的共聚物，聚磷腈，油性乳剂及类似物。

WO-A-94 16681建议以油包水、水包油或水包油包水乳剂形式的佐剂疫苗组合物补充表达异源包膜病毒基因的重组活疫苗。

这样的溶液可能有许多的缺点。

实际应用中，在一方面，最终用户应该有冻干的活性组分，另一方面，有已经配好的乳剂，使得能够将冻干活性组分重构。

储存过程中乳剂缺乏稳定性对于重建疫苗的效果和安全性可能有害。

减毒活微生物的活性因为油相的不稳定可能受到质疑。当病毒因此失去其存活性时尤其如此。

乳剂中的疫苗在注射部位的安全性也会产生问题。

因此本发明的目的是提供新的疫苗组合物，其基于表达至少一种异源核酸序列、特别是异源基因的重组活疫苗，包含能够使得与无佐剂的相同疫苗相比显著增强免疫并且非常适合于这类疫苗的佐剂。

申请人现发现聚羧乙烯聚合物类化合物在这种类型疫苗的要求条件下能够作为佐剂，而且其比例出人意料。在动物疱疹病毒上进行的试验(EHV-1，马疱疹病毒)显示添加聚羧乙烯聚合物在实验感染中能够以出人意料的比例降低病毒排泄。其余在马中用马流感病毒A进行的试验令人惊异的表明，能够获得较早和较高的血清抗体滴度，优于那些用最好的商业疫苗获得的效果。