[发明专利]一种新的多肽——人转座酶105和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人转座酶105，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

Mariner转座子属于转座因子中的mariner/Tcl超家族，广泛分布于昆虫、线虫、扁形虫和人类等动物体中，是最简单的真核转座子之一。它们的平均长度约为1.3kb，包含一个开放读框(ORF)，编码转座酶蛋白，两末端有反向重复序列(ITRs)约30bp。

Mariner转座子以一种“剪切与粘贴”的机制在DNA中间体上移动，结果是转座子被从原先的地方切割下来，并插入基因组的新位置。此过程有两个关键因素：一是需有活性的转座酶，二是转座子末端的反向重复序列(ITRs)，转座酶识别并移动ITRs。Mariner转座子总是整合到一个TA双核苷酸序列中，而此序列在插入过程中被复制。最近证实，纯化后的mariner转座酶在体外能有效介导转座作用，且转座酶功能实现无需宿主特异性因子的参与。

Tcl/mariner超家族包括Tcl、mariner和pogo转座子，长度约为1300-2400bp，包含一编码转座酶的基因，两端有ITPs。虽然在基序上有一些差别(转座酶蛋白15％同源性)，超家族成员有同一起源，且有相同的结构和分子转座机制。

转座酶主要的结构功能分析集中于N末端的DNA结合区。

Tcl和mariner转座酶有双重的DNA结合区，包含两个HTH结构，第一个类似于一些转录因子的成对区，而第二个处于一同源性DNA结合区中。Pogo转座酶只含单一HTH结构。核酸定位信号(NLS)与DNA结合区部分重叠，在转座作用中起调控作用。另一主要区域为催化区，有DD35D或DD35E的特殊结构，由一个保守的Asp与一段“D35D”或“D35E”区域相连，此区域包括保守的精氨酸和谷氨酸残基，中间一般有35个相对保守的氨基酸残基。

转座子两端有ITPs，包含转座酶结合位点。在Tcl/mariner超家族的不同成员中，ITPs的长度与结合位点的数量和类型均有所差异。Tcl和mariner最简单，ITPs＜100bp，每个只含单一转座酶结合位点。结合位点也是双重结构，5′端部分由同源区识别，而3′端部分与成对区相互作用。

在转座作用中转座酶和ITRs参与一系列的分子作用，导致转座子从原序列中切割下来，又重新整合到不同的基因座中(剪切与粘贴作用)。

转座子经剪切作用后两端产生一对交错的双链DNA缺口，这种交错切口可能在染色体或其它DNA分子中形成转座子“足迹”。在某些情况下，“足迹”可能是交错末端直接结合的结果。Tcl/mariner转座子一般留下2-3bp的“足迹”。由于随后的整合反应由3′端完成，5′端切割位点只影响需修复的单链缺口的大小，而对转座作用的最终产物没有影响。

绝大多数Tcl/mariner转座子整合入TA双核苷酸序列。TA旁侧的序列可能对转座酶识别靶序列产生影响，另外，DNA的结构也会影响转座子的活动。

除转座酶外，Tcl/mariner转座子在转座作用中不需其它蛋白参与，这表明它们没有严格的宿主限制。

根据氨基酸同源比较的结果，本发明的多肽被推断鉴定为一种新的人转座酶105。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人转座酶105以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人转座酶105的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人转座酶105的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人转座酶105的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人转座酶105的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人转座酶105的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人转座酶105异常相关的疾病的方法。

在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的人转座酶105，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物、类似物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。