[发明专利]生物菌剂及制备方法

权利要求书

1、一种生物菌剂，其特征在于：由下述八株菌种组成

(1)固    氮    菌(AS.1.222 Azotobater)、

(2)巨大芽孢杆菌(AS.1.151 Bacillus megaterium de Bary)、

(3)胶冻样芽孢杆菌(AS.1.153 Bacillus mucilaginosus)、

(4)枯草芽孢杆菌(AS.1.108 Bacillus subtilis)、

(5)产黄纤维单胞菌(AS.1.102 Cellulomonas flaxigera)、

(6)荧光假单胞菌(AS.1.867 Pseudomonas fluorescens)、

(7)恶臭假单胞菌(AS.1.870 Pseudomonas putida)、

(8)苏云金芽孢杆菌松躅亚种(AS.1.294 Bacillus thuringiensis)。

2、权利要求1所述的生物菌剂的制备方法，其特征在于：生产工艺步骤如下：

一、八株菌种分别经原始菌种—斜面菌种，其中，各种斜面培养基配比如下：

(1)固氮菌斜面培养基配比(重量份)：

    KH₂PO4           0.1—0.4

    K₂HPO4           0.5—1.2

    MgSO₄·7H₂O     0.05—0.4

    CaSO₄·2H₂O     0.005—0.02

    FeCl₃            微量

    Na₂MoO₄·2H₂O  微量

    酵母膏            0.2—0.8

    甘露醇            15—25

    琼脂              18—25

    葡萄糖            2％

    PH7.2的蒸馏水     1升

其中，灭菌121C/30min，培养温度30℃；

(2)巨大芽孢杆菌斜面培养基配比(重量份)：

    蛋白胨           4—6

    牛肉膏           2—4

    NaCl             4—6

    琼脂            18—25

    PH7.0—7.1的水  1升其中，灭菌121℃/30min；(3)胶冻样芽孢杆菌斜面培养基配比同(2)；(4)枯草芽孢杆菌斜面培养基配比同(2)；(5)产黄纤维单胞菌斜面培养基配比(重量份)：

    NaCl               4—8

    MgSO₄·7H₂O      0.05—0.2

    KH₂PO₄           0.4—0.6

    CaCl₂             0.05—0.2

    K₂HPO₄           1—3

    (NH₄)₂SO₄       1—4

    酵母膏              0.5—2

    滤纸条              1片

    PH7.0—7.5的蒸馏水  1升

其中，灭菌121℃/30min；

(6)荧光假单胞菌斜面培养基配比同(2)；

(7)恶臭假单胞菌斜面培养基配比同(2)；

(8)苏云金芽孢杆菌松躅亚种斜面培养基配比同(2)；

二、由斜面菌种—扩大菌种，其中，各种生产菌的三角瓶摇床发酵培养基配比同斜面培养基配比减去琼脂即可，三角瓶摇床深层发酵的温度为30℃，时间是48小时；

三、把经过深层发酵的八株扩大菌种混合再经过一级种子罐发酵→二级种子罐发酵→三级种子罐发酵→四级种子罐发酵四步工艺，最后第四级发酵罐，放罐标准含菌数为20—150×10⁸个/ml，四步发酵工艺的参数如下：

(1)发酵温度：30℃±1℃；

(2)PH：7.0—7.2；(3)无菌空气通入量：M³/min；

(4)发酵时间：连续48小时；

(5)罐压控制：0.3—0.5Kg/cm²左右；

(6)接种量：10％(含菌数10×10⁸—15×10⁸个/ml)；

其中，一级发酵罐培养液的配比(重量份)：

        重过磷酸钙    28—34

        氯化钾        28—34

        尿素          56—64

用玉米糖浆调糖度至4°—5°(依糖度代调整)、自来水28千克、灭菌108℃/40min；

以下各级发酵罐培养液逐步以10倍量放大，其培养参数相同；

四、经拌载体(矿石粉)，制成本发明所述的产品。