[发明专利]一种用于荧光分析体系的组合物

说明书

本发明涉及一种用于荧光测定的组合物。本发明进一步涉及一种荧光测定方法以及该组合物在荧光测定中的应用。荧光测定在测定和分析领域、尤其是在生物学中已经越来越多地使用。例如，酶免疫分析(EIA)，基于酶作为标记物的测定，已经在生物分析领域广泛地应用(T.Portmann和S.T.Kiessig，免疫方法杂志(J.Immunol.Method)(1992)，150，5，和M.Oellrich，J.Clin.Chem.Clin.Biochem.，(1989)，22，895)，这归因于EIA的高感度和确定性，许多酶标记物的可获得性，以及标记试剂长时间的稳定性和操作安全性。最常用的EIA的酶标记物为碱金属磷酸酶，辣根过氧化酶，和半乳糖苷酶。大部分的酶标记物由分光光度法(H.Labrousse，J.L．Guesdon，J.Ragimbeau，S.Avrameas，免疫方法杂志(J.Immunol.Method)(1982)，48，133)，分光荧光法(E．Ishikawa，Clin.Biochem.，(1987)，20，375)，化学发光法(H．Sasamoto，M.Maeda和A.Tsuji，Anal.Chim.Acta(1995)，306，161)和电化学[K.P.Wehemeyer，H．B.Halsall和W.R Halsall，Anal.Chem.，(1995)，31，1546]来测试。

碱金属磷酸酶作为EIA标记物已经广泛使用，并且在分光光度法中使用对-硝基苯磷酸酯(PNPP)[C.S.Chiang，T.Grove，M.Cooper等，Clin.Chem.(1989)，35，946]，在分光荧光法中使用4-甲基7-羟基香豆素磷酸酯(4MUP)，在化学发光法中使用金刚烷-1，2-二氧杂环芳基磷酸酯(AMPPD)及其衍生物(I.Bronstein，B.Edwards和J.C.Voyta，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)(1989)，4，99)，在电化学中使用苯基磷酸酯[K.R.Wehemeyer，H．B.Halsall，W.R.Volle和I.W.Chen，分析化学(Anal.Chem.)(1986)，58，135)和对-氨基苯基磷酸酯(PAPP)[D.A.Palmer，T.E．Edmonds和N.J.Seare，Analyst，(1992)，117，1679]作为被测试物。

碱金属磷酸酶的已知的荧光分析底物是4-甲基7-羟基香豆素磷酸酯和荧光黄二磷酸酯。这些底物(4-甲基7-羟基香豆素磷酸酯和荧光黄二磷酸酯)被碱金属磷酸酶水解，成为4-甲基伞形酮和荧光黄，分别在大约450nm和525nm发出荧光。萘并荧光黄磷酸酯(NFP)是以上提到的碱金属磷酸酶底物的一种替代，它有诸多优点。NFP被碱金属磷酸酶水解得到萘并荧光黄，其激发态分光光谱特征值为595nm，发射光谱的为660nm，明显落入到电磁波谱的长波长/近红外区域。在长波长区域工作的优点最近已经回顾(J.N.Miller，荧光光谱(Fluorescence Spectroscopy)，(1993)，5/2，34)。这些优点包括：

a)较低的背景散射性-Raman和Rayleigh

b)更少的光分解

c)具有很少的明亮的荧光团，带来更少的背景荧光

d)紧凑的亮光光源容易获得

e)好的固态检测器。

最近我们的研究小组已经证实：测试或使用碱金属磷酸酶可以通过使用萘并荧光黄磷酸酯，环糊精或表面活性剂和一种固态激光二极管检测器来确定。在荧光团领域发展的同时，检测器也相应地有所进展。

我们最近开发出一种检测装置，尤其是，使用荧光检测器来分析液流中的试样。我们这种新检测器其中的一个独特的优点是其对单一试样中多于一个荧光团进行分析的能力。这要求在一个试样中每个荧光团与检测器中的特定的激光相匹配，即最大吸收基本在激光的窄带宽的最大激发波长处。有许多荧光团可以与市售易得的激光相匹配，因而这样的荧光团的数目正在不断增多。

本发明的目的是提供一种用于荧光检测方法的新组合物。

本发明的第一方面是提供一种包含酶底物的组合物，这种酶底物是荧光团的一种非荧光衍生物，以及一种使自然状态下最大值为大于450nm的荧光团的最大吸收波长移动的移动试剂，移动试剂以一预定的量存在，以将该最大值移动到预设定值。