[发明专利]利用具重组位点的核酸进行重组克隆

权利要求书

1．克隆或亚克隆一种或多种所需核酸分子的方法，包括：

(a)体外或体内组合

(ⅰ)含侧翼有至少两个重组位点的一个或多个所需核酸区段的一种或多种插入物供体分子，其中所说的重组位点基本上不相互重组；

(ⅱ)含至少两个重组位点的一种或多种载体供体分子，其中所说的重组位点基本上不相互重组；及

(ⅲ)一种或多种位点特异性重组蛋白质；

(b)在足以转移一个或多个所说所需区段至一种或多种所说载体供体分子内的条件下温育所说的组合，从而产生一种或多种所需产物核酸分子；

(c)体外或体内组合

(ⅰ)含侧翼有两个或多个重组位点之所说所需区段的一种或多种所说产物分子，其中所说的重组位点基本上不相互重组；

(ⅱ)含两个或多个重组位点的一种或多种不同载体供体分子，其中所说的重组位点基本上不相互重组；及

(ⅲ)一种或多种位点特异性重组蛋白质；及

(d)在足以转移一个或多个所说所需区段至一种或多种不同载体供体分子内的条件下温育所说的组合，从而产生一种或多种不同的产物分子。

2．权利要求1的方法，其中进一步包括在足以转移一个或多个所说所需区段至所说不同载体供体分子内的条件下将该不同产物分子与一种或多种不同的载体供体分子温育。

3．一种克隆或亚克隆所需核酸分子的方法，包括：

a)体外或体内组合

ⅰ)含侧翼有两个或多个重组位点的一个或多个核酸区段的一种或多种插入物供体分子，其中所说的重组位点基本上不相互重组；

ⅱ)含两个或多个重组位点的两个或多个不同载体供体分子，其中所说的重组位点基本上不相互重组；及

ⅲ)一种或多种位点特异性重组蛋白质；及

b)在足以转移一个或多个所说所需区段至所说不同载体供体分子内的条件下温育所说的组合，从而产生两种或多种不同产物分子。

4．权利要求1或3的方法，其中所说的插入物供体分子来自基因组DNA。

5．权利要求1或3的方法，其中所说的插入物供体分子来自cDNA。

6．权利要求1或3的方法，其中所说的插入物供体分子是通过化学合成产生的。

7．权利要求1或3的方法，其中所说的载体供体分子包含至少一个选择标记。

8．权利要求7的方法，其中的选择标记包含至少一个选自下组的DNA区段：

(a)编码在受体细胞内提供抗原本有毒的毒性化合物之抗性的产物的DNA区段；

(b)编码受体细胞中原本缺乏的产物的DNA区段；

(c)所编码产物可抑制受体细胞内一种基因产物活性的DNA区段；

(d)所编码产物可鉴定的DNA区段；

(e)所编码产物可抑制受体细胞内细胞功能的DNA区段；

(f)可抑制以上(a)-(e)中任何DNA区段的活性的DNA区段；

(g)可结合能修饰底物的产物的DNA区段；

(h)编码可被蛋白质、RNA、DNA或化学物质识别之特异核苷酸识别序列的DNA区段；

(ⅰ)缺失时直接或间接在受体细胞内赋予被特殊化合物杀死之细胞敏感性的DNA区段；

(j)所编码产物在受体细胞内有毒的DNA区段；及

(k)可用于分离或鉴定所需分子的DNA区段。

9．权利要求8的方法，其中所说选择标记包括选自下组的至少一个标记：抗生素抗性基因、tRNA基因、营养缺陷型标记、毒性基因、表型标记、反义寡核苷酸、限制性内切核酸酶、限制性内切核酸酶切割位点、酶切割位点、蛋白质结合位点及互补于PCR引物序列的序列。

10．权利要求1或3的方法，其中所说的载体供体分子包含原核和／或真核载体。

11．权利要求10的方法，其中所说的真核载体包含可在酵母细胞、植物细胞、鱼类细胞、真核细胞、哺乳动物细胞和／或昆虫细胞内增殖和／或复制的载体。

12．权利要求10的方法，其中所说的原核载体包含可在革兰氏阴性或阳性细菌内增殖和／或复制的载体。