[发明专利]白细胞介素－18结合蛋白质及其制备和用途

说明书

发明领域

本发明涉及能够结合IL-18的白细胞介素-18(IL-18)结合蛋白质，以下简称IL-18BP。这一发明涉及从体液中获得的可溶性IL-18BP，涉及宿主细胞中通过适当的DNA载体表达得到的可溶性IL-18BP，涉及宿主细胞中通过适当DNA载体表达可得的IL-18BP的病毒编码的同系物，涉及用于在人和其它哺乳动物中表达IL-18BP的载体，涉及抗IL-18BP的抗体，涉及所述的IL-18BP通过调节和/或封闭IL-18活性的治疗用途，涉及所述的表达载体在调节和/或封闭IL-18活性中的治疗用途和涉及抗体的用途。

发明背景

在1989年，公开了从小鼠脾细胞中获得的诱导干扰素γ(IFN-γ)的外毒素诱导的血清活性(27)。这一血清活性的功能不是IFN-γ的直接诱导物而是与IL-2或促分裂原一起的共同刺激物。从外毒素处理后的对小鼠的血清活性的纯化尝试表明显然同源的50～55千道尔顿(kDa)蛋白质(26)。因为其它细胞因子可以作为IFN-γ产生的共刺激物，IL-1，IL-4，IL-5，IL-6或TNF的中和抗体中及血清活性的失败表明它是不同的因子。在1995年，同样这些科学家证明IFN-γ产生的外毒素诱导的共刺激物存在于利用P.acnes(31)预处理的小鼠的肝提取物。在这一实例中，肝巨嗜细胞群体(Kupffer细胞)扩展并且在这些小鼠中，在非预处理小鼠中非致命的低剂量细菌脂多糖(LPS)变成致命的。从1,200克P.acnes处理的小鼠肝将命名为IFN-γ-诱导的因子(IGIF)和后来命名为白细胞介素-18(IL-18)纯化成匀浆物。利用起源于纯化的IL-18的氨基酸序列的简并寡核苷酸克隆小鼠IL-18cDNA(31)。IL-18是157个氨基酸的18～19千道尔顿蛋白质，它与数据库中的任何肽没有明显的相似性。在Kupffer细胞和活化的巨嗜细胞中是容易检测到IL-18和白细胞介素-12(IL-12)的信使RNA。重组IL-18显然通过独立的途径比IL-12更具潜力地诱导IFN-γ(31)。与外毒素诱导的血清活性相似，IL-18本身不诱导IFN-γ，但初级功能是与促分裂原或IL-2一起作为共刺激物。IL-18显然通过IL-2独立途径增强T细胞增殖，并且增强Th1细胞因子的体外产生并且当将IL-12与增强的IFN-γ产生结合时显示了协同作用(24)。

小鼠IL-18的中和抗体显示了能够在P.acnes预处理的小鼠中预防低剂量LPS的致死。在预处理的小鼠中其它人已经报道了IFN-γ作为LPS致死的介导物的重要性。例如，中和抗IFN-γ抗体保护小鼠不会Shwartzman状休克(16)，并且IFN-γ受体缺陷的半乳糖胺处理的小鼠是抗LPS诱导的死亡的(7)。所以，不能预期小鼠IL-18的中和抗体保护P.acnes预处理小鼠抵抗致死LPS(31)。抗小鼠IL-18处理也保护生存的小鼠抵抗严重的肝细胞毒性。

在克隆小鼠形成后，在1996年报道了IL-18的人cDNA序列(38)。重组的人IL-18显示了天然的IL-18活性(38)。人重组IL-18在人T细胞上没有直接的IFN-γ诱导活性，但作用是生产IFN-γ和其它T辅助细胞-1(Th1)细胞因子的共刺激物(38)。到目前为止，认为IL-18可初步作为Th1细胞因子产生(IFN-γ，IL-2和粒细胞巨嗜细胞菌落刺激因子)的共刺激物(20)，并且也作为小鼠天然杀死细胞克隆的FAS配体介导的细胞毒性的共刺激物(37)。

通过克隆来自受感染组织的IL-18和研究IL-18基因表达，发现了这一细胞因子与自身免疫疾病紧密相关。非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠自发发展了自身免疫胰岛炎和糖尿病，这两种病在单独注射了环磷酰胺时得到加速和同步。在早期胰岛炎过程中，在NOD小鼠胰腺中通过逆转录酶PCR证明了IL-18mRNA。在环磷酰胺处理后快速增加了IL-18mRNA的水平并且在此之前，IFN-γmRNA升高了，随后发展成糖尿病。有趣的是，这些动力学模仿了导致与单个mRNA水平紧密联系的IL-12-p40mRNA。在测序之后从胰腺RNA克隆IL-18cDNA表明从Kupffer细胞克隆的IL-18序列和体内预活化巨嗜细胞的同一性。当没有平行处理来自Balb/c的巨嗜细胞，同样NOD小鼠巨嗜细胞通过IL-18基因表达应答环磷酰胺。所以，在自身免疫NOD小鼠中IL-18表达非正常地调节，并且与糖尿病发展紧密相关(32)。