[发明专利]LAG－3剪接变体

说明书

本发明涉及LAG-3分子的不同剪接变体的鉴定及其作为免疫调节剂的用途。

现在已经认识到，MHC II类区域编码的蛋白参与了免疫识别的许多方面，包括不同淋巴样细胞(如淋巴细胞和抗原呈递细胞)之间的相互作用。不同的观察结果还表明，不通过CD4发生的其它机制参与了T辅助淋巴细胞的效应功能。

人激活的T和NK细胞中表达的淋巴细胞激活基因3(LAG-3)编码了498个氨基酸(aa)的I型膜蛋白，其具有四个细胞外免疫球蛋白超家族(IgSF)结构域(1)。分析该序列表明，尽管整个氨基酸序列与人CD4的同源性仅高于背景水平(约20％的序列相同性)，但是有值得注意的一小段序列与CD4对应位置上发现的一段氨基酸序列相同。在LAG-3分子内，在结构域1(D1)和3(D3)之间以及结构域2(D2)和4(D4)之间发现有一些内部下列同源，这提示LAG-3象CD4一样通过预先存在的2 IgSF结构(1)基因复制而进化得到。另外，LAG-3和CD4基因在染色体12短臂远部上非常靠近(2，B.Huard，P.Gaulard，F.Faure，T.Hercend，F.Triebel，Immunogenetics 39，213，1994)。因此，LAG-3和CD4可视作是IgSF中进化上的“第一代表亲”(2)。

本发明者以前采用定量细胞粘附试验曾表明，LAG-3转染的Cos-7细胞和MHC II⁺型B淋巴细胞之间的花结形成特异性地取决于LAG-3/MHC II型相互作用(3)。用LAG-3Ig融合蛋白还观察到LAG-3与各种人II型分子(包括不同等位基因和同种型)、以及和小鼠及猴II型分子之间有直接和特异性的结合(4)。该二聚LAG-3Ig重组球蛋白与MHC II型分子单型残基结合的亲合力比CD4Ig高得多(Kd＝60nM，37℃)(5)；LAG-3Ig实际上能在细胞间粘附试验中阻断CD4/MHC II型相互作用(5)。

已经用LAG-3特异性单克隆抗体(mAb)(6)和LAG-3Ig分子(7)研究了LAG-3/II型分子相互反应所起的作用。这种相互反应导致下游的T细胞克隆激活。产生LAG-3/MHC II型相互作用通过T-T细胞接触来介导，据推测是通过阴性MHCII型信号传导到T细胞。总之，在体外和在体内，LAG-3都仅仅在淋巴细胞激活后才表达(6)，因此它在应答的诱导阶段中不起作用(与CD4相反)。此外，单克隆抗体阻断试验已经表明，LAG-3没有参与MHC II型限制的CD4⁺ T细胞克隆的识别阶段。因此，LAG-3的功能作用显然与其它MHC配体CD4和CD8的功能不同。目前认为，T细胞MHC II型分子起的作用与CTLA-4在LAG-3结合后所起作用类似(4)，即诱导以前激活的T细胞克隆性缺失(8)。

最近已经发现，LAG-3优先被激活的Th1细胞(即产生IFN-γ和TNF的T辅助细胞)表达和释放，并可由IL-12(一种强效的Th1-诱导性细胞因子)上调(F.Annunziato，R.Manetti，L.Tomasevic，MG.Giudizi，R.Biagiotti，V.Gianno，P.Germano，C.Mavilia，E.Maggi和S.Romagnani，FASEB J.10，769-775，1996)。在患复发性多发性硬化(MS)的患者(出处同上)和患系统性红斑狼疮的少数患者(S.Romagnani，clin.Immun0l.Immunopath.80，225-535，1996)的血清中也发现了高水平的可溶性LAG-3(sLAG-3)。这些发现提示，LAG-3可以作为Th1介导的免疫疾病(如桥本氏甲状腺炎、I型糖尿病、多发性硬化、Chron’s疾病、类风湿性关节炎、急性异体移植排斥反应和急性移植物抗宿主疾病(GVHD))的有用的诊断标记物。另一方面，MS患者以及可能患上述疾病的其它患者血清中存在高水平的sLAG-3支持了sLAG-3天然存在的保护作用，因为它能与膜结合形式竞争，从而阻断了LAG-3介导的免疫应答。

本发明者已经调查了是否因为核转录物的其它剪接而表达出其它形式的LAG-3。