[发明专利]集合血样的PCR试验方法

说明书

本申请是申请号为08/683,784、申请日为1996年7月16日的申请的部分继续申请，第08/683,784号申请是申请日为1995年4月10日的第08/419,620号申请的分案申请，在此特意作为参考引入其内容。

总的来说，本发明涉及准备和分析取自捐献血浆的试样以便唯一地鉴别出受病毒感染的捐献血浆的方法和系统。确切地说，本发明涉及一种用于形成独立的、分别密封的且装有与捐献物所含相同的血浆的试样的相连容器的装置和方法。本发明也涉及一种用于从容器形成最初的筛选试验库并根据一种在最少的试验循环中鉴别出各感染捐献物的算法检查试验库是否存在病毒的装置和方法。

血液、血浆和生物流体捐献程序在药品和血制品的制造中是非常重要的第一步，这些药品和血制品可提高生活质量并且在各种外创伤情况下被用来挽救生命。这样的产品被用来治疗免疫系统紊乱、治疗血友病，并且在外科手术中被用于保持并储蓄血量和其它治疗协议中。血液、血浆和生物流体的治疗性使用要求这些物质的捐献者尽可能没有受过病毒感染。通常，对来自每份血液、血浆或其它捐献液体的血清试样进行各种抗体试验，这些抗体是由特殊病毒如丙肝病毒(HCV)和两种人类免疫缺陷病毒(HIV-1和HIV-2)引起的。另外，可以对血清试样进行针对特定病毒如乙肝病毒(HBV)的抗原试验以及进行由这样的病毒引起的抗体的试验。如果试样血清因存在特殊抗体或抗原而呈阳性，则此捐献物不会被继续使用。

但是，某种病毒如乙肝病毒的抗原试验被认为与传染性有关，而抗体试验则不是。人们很早就已经知道了，血浆捐献者可能实际上已经感染了病毒，而与该病毒有关的抗体的血清学试验呈阴性。例如，在捐献者可能被病毒感染和在捐献者系统内出现由该病毒引起的抗体之间有一段时间。从血液中第一次出现病毒到存在由病毒引起的可检测抗体的时间段被定义为“观察期”(window period)。在病毒是HIV的情况下，平均观察期约为22天，而对HCV来说，平均观察期被估算约为98天。因此，如果在观察期内进行试验，即在病毒感染和产生抗体之间的时间段内进行试验，则旨在检出抗体的试验可能给受感染的捐献者一个错误的显示。另外，即使传统的HBV试验包括针对抗体和抗原的试验，通过更敏感的方式进行的试验已经证实了在试样中存在HBV病毒，而这在HBV抗原试验中呈阴性。

为了进一步确保其没有受到初期病毒感染，一种已经经过现有的抗体和抗原试验的捐献物检验方法涉及通过聚合酶链反应(PCR)方法检验捐献物。PCR是一种通过放大病毒基因组验出是否在生物材料中存在与有关病毒相关的特殊的DNA或RNA序列的很敏感的方法。由于PCR试验的目的是检测是否存在病毒本身的基本组成，所以几乎可以在感染后马上发现捐献者体中存在病毒。因此，理论上不存在试验可能错误指示出没有感染的观察期。在美国专利No.5,176,995中对PCR试验的方法和实际应用作了适当描述，特意在此作为参考地引入这篇美国专利文献。

但是，PCR试验很昂贵，并且由于整个捐献者人群中包括比较少的PCR呈阳性的捐献人，所以各捐献物的单独检验是得不偿失的或是经济不合理的。于是，需要一种用于检验大量血液或血浆捐献物以便排除其中病毒感染超过预定水平的单位的经济有效的方法。

一种检验大量捐献血浆的方法是集中许多份个人的捐献血浆。接着，对血浆库进行PCR试验，根据PCR试验的结果，构成血浆库的各捐献物或被留下或被舍弃。尽管减少了PCR试验的数目和与之有关的花费，但此方法还是导致了明显浪费了大量无病毒的捐献物。由于仅仅一份其病毒感染程度超过预定水平的捐献物就会致使一个试样库显现PCR阳性，所以构成试样库的其余捐献物可能分别显现PCR阴性。这种结果极可能出现在于整个捐献者中有少量PCR阳性捐献人的情况下。在传统的集合方法中，根据PCR阳性结果，舍弃所有构成试样库的捐献物，这其中包括那些PCR分别呈阴性的捐献物。