[发明专利]含有特异于胶原Ⅱ的T细胞表位的肽

说明书

本发明提供了起源于胶原CII的新肽，他们的制备方法和他们在医学治疗，特别是类风湿关节炎和相关的自身免疫病的治疗中的用途。

胶原分子是结缔组织的一些主要的结构蛋白。他们包括形成具有独特的X-Y-Gly重复氨基酸序列的延伸的三股螺旋结构的三个多肽链。软骨的细胞外基质独特地主要含有II型胶原，但也含有IX和XI型胶原。最近从小鼠已经克隆了CII，并且它的1419个氨基酸的全部序列已经确定(Metsarantadm等人，1991，生物化学杂志，266：16862-9)。

认为II型胶原“躲避”了免疫系统的细胞，因为它只有在无血管组织如软骨和眼睛的玻璃体中发现。所以，免疫系统不完全是耐受它自身的II型胶原的，作为隔离的蛋白质，CII具有当在Freund完全佐药中注射时，诱导组织特异的自身免疫病的能力。它诱导的疾病命名为胶原诱导关节炎(CIA)。CIA通常是注射外源CII诱导的，它引起能够识别对应的自我蛋白质的T细胞和抗体的产生。

CIA在小鼠中的敏感性局限于I-A^q和I-A^r型MHC。这些分子的结合基序相似于人DR4和DR1的那些。所以，相信CII是类风湿关节炎(RA)中的自身抗原。

对于RA目前没有原因治疗(causal therapy)。现存的治疗方法例如施用皮质类固醇是非特异的，正如他们一般抑制免疫应答。目前的研究提出在RA的发病机理中自身反应T细胞的重要作用，这导致了一个概念，鼻/口腔给药免疫原性肽导致这些致病原T细胞的耐受性可能具有治疗潜力的。

Miyahara，H.等人(免疫学1995，86：110-115)叙述了在小鼠中的关节炎的抑制中II型胶原的片断的用途。但是，利用的片断(CII607-621)不含有人的RA的HLA-DR的任何分子的结合基序，并且所以在人RA治疗中用作耐受原将没有效果。

WO96/20950的目的是叙述能够结合人HLA DRB1MHC蛋白质的II型胶原肽，这表明将可用于RA治疗中。但是，这些存在于胶原CII蛋白质的273-404区的肽表明在推断的RA的耐受原的有关测试中只有微弱的活性。本发明的肽的治疗效力明显更大。

本发明提供了已经发现在诱导起源于T细胞表位的胶原CII的免疫耐受性中特别有效的肽。这些肽可以用于自身免疫症状如类风湿关节炎的治疗中。

所以，根据本发明提供了分离的肽，具有或包含通式(I)：

A₁-Xaa-Gly-A₄-A₅-Gly-A₇-Xaa-Gly    (I)的氨基酸序列

其中：

A₁代表具有芳香或脂肪族侧链的氨基酸残基，

A₄代表天冬酰胺或精氨酸残基，或具有芳香或脂肪族侧链的氨基酸残基，

A₅代表任何天然存在的氨基酸，

A₇代表具有带负电的残基的氨基酸，

Xaa代表任何氨基酸残基，和

Gly代表甘氨酸残基。

本发明的肽优选地是9，10，11，12，13，14或15个氨基酸肽；和更优选地是9个氨基酸的肽。

在本发明的肽中，下面独立地优选用：

-A₁是F，I，L，A或P并且最优选地是F

-A₄是F，I，L，A，R，N或P并且最优选地是F

-A₅是K或R

-A₇是E，D，Q，P或N并且最优选地是Q。