[发明专利]鸡新城疫油佐剂灭活苗及其制备方法

说明书

本发明涉及含有抗原或抗体的医制品，具体讲是鸡新城疫疫苗及其制备方法。

鸡新城疫(ND)是严重危害养鸡业发展的主要疫病之一。目前，在养鸡生产中主要应用ND弱毒冻干苗，该苗免疫效果易受母源抗体影响，免疫后出现鸡群抗体不高或参差不齐，并且有相当一部分鸡抗体水平在免疫保护的临界线以下，一旦有强毒侵入便会导致鸡新城疫在鸡群中爆发流行。此外，现有饲料原粮中硒的含量低于0.03～0.05PPm。硒具有加强原发性免疫反应，促进动物体产生的IgM抗体与中和抗体等功能。

本发明的目的在于提供一种鸡新城疫油佐剂灭活苗及其制备方法，所制得的疫苗给鸡注射后在体内缓慢释放，促进鸡产生免疫反应。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种鸡新城疫油佐剂灭活苗，该疫苗由矿物油佐剂包裹着含鸡新城疫病毒(NDV)抗原的水相。

上述疫苗的制备方法是：取鸡新城疫病毒(NDV)给健康鸡胚(9～10日龄)接种，72小时后收集鸡胚尿囊液，经灭活后加入吐温--80和亚硒酸钠制成水相，再与矿物油(油相)按1∶3比例经胶体磨充分混合后制成油包水乳剂。

将NDV经鸡胚接种后收集鸡胚尿囊液，经灭活后加硒，再与油相混合成油包水乳剂，使用本发明提供的疫苗给鸡免疫注射后，乳剂的油滴会在鸡体内逐渐释放出来，从而起到少量多次抗原刺激作用，增强并维持鸡体内免疫反应。

以下结合实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例

鸡新城疫油佐剂灭活苗，是由矿物油佐剂包裹着含鸡新城疫病毒(NDV)抗原的水相，该疫苗中含有硒，其外观特征为白色乳剂，且无分层现象。

上述鸡新城疫油佐剂灭活苗，是采用以下方法制得的：取鸡新城疫病毒(NDV)给健康鸡胚(9～10日龄)接种，72小时后收集鸡胚尿囊液，经灭活后加入吐温--80和亚硒酸钠制成水相，再与矿物油(油相)按1∶3比例经胶体磨充分混合后制成油包水乳剂。

上述制备方法的具体实施过程如下：

步骤一

以NDV毒株按常规法接种9～10龄鸡胚，72小时后收集鸡胚尿囊液，加入4％的甲醛灭活，随加随摇，使甲醛最终浓度为0.1％。

该步骤主要是用于灭活鸡胚尿囊液病毒。另外，还可采用其它一些制剂进行灭活，具体内容有：

a:β--丙内脂灭活：在鸡胚尿囊液中加入10％的β--丙内脂，使其最终浓度为1/1500；

b：乙酰苯乙烯亚胺(Acety lethy lenimine-AEI)灭活：在尿囊液中加入10％的AEI，使最终浓度为0.1％，置30℃温箱中灭活8小时取出，加入20％的Na₂SO₃·5H₂O溶液，使最终含量为0.5％，以中和AEI。

步骤二

取灭活后的鸡胚尿囊液，该菌液每100份加入4份的吐温--80，然后加入1％的亚硒酸钠，使亚硒酸钠的浓度为5PPm，制成水相。

此过程一方面用于提供硒源，另一方面，吐温--80(TWeen--80)属免疫增强剂、稳定剂。化学名为聚山梨醇脂--80，同类品有吐温--20。

步骤三

制备油相，以10#白油94份加6份司本--80混合后，每100毫升混合溶液再加2克硬脂酸铝为油佐剂。司本--80(SPan)，用作乳化剂和增溶剂，化学名为失水山梨醇单油酸脂，SPan--80的同类品有SPan--20,SPan--40,SPan-60。所述硬脂酸铝属油质注射剂的助悬剂。

步骤四

将上述水相与油相按1∶3的比例经胶体磨充分混合制成油包水灭活苗。

本发明制得的油佐剂灭活苗，使用该疫苗给鸡进行免疫注射后，乳剂油滴会在鸡体内逐渐吸收，从而将抗原缓慢释放，以达到刺激和维持鸡体免疫反应的效果。