[发明专利]鸡传染性法氏囊病病毒疫苗、制备方法及其应用

说明书

本发明属于病毒领域，尤指一种利用高压力技术(high hydrostatic pressuretechnique)制备鸡传染性法氏囊病病毒疫苗。

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus，IBDV)是引起鸡急性高度接触性传染病—鸡传染性法氏囊病的病原，鸡法氏囊是其侵染的靶器官，该病毒不仅直接引起雏鸡发病，发病率近100％，死亡率20-30％，而且雏鸡发病后可以导致长期严重的免疫抑制，大大增加了继发感染的概率，是目前世界养禽业危害最严重的疾病之一。目前一般采用注射IBDV疫苗来预防和控制IBDV感染，较广泛使用的IBDV疫苗有：鸡法氏囊弱毒疫苗和鸡法氏囊油乳剂灭活苗(阎继业主编，畜禽药物手册，第二版，金盾出版社，1997，646-648)，前者是采取感染鸡法氏囊病毒合格的鸡胚和鸡胚液加佐剂制成，后者则是发病鸡的法氏囊磨碎后加入保护剂而成。由于IBDV抗原变异快、血清亚型多等因素的影响，目前的弱毒疫苗在安全性和免疫效果上变化很大(彭发泉，中国畜禽传染病，1995，3：55-58)。油乳剂灭活苗免疫效果较好，但病鸡法氏囊来源少，成本高。用不同基因工程方法制备的IBDV疫苗可靠性和免疫效率变化也很大，而且成本较高，周期较长，目前还难以推广应用(姜平，蔡宝祥，中国兽医杂志，1996，22：53-54)。高压力技术是研究生物体系的有效工具之一，同时在生物技术中显示出很高的应用价值(Heremans K.ed.，High PressureResearch in the Bioscience and Biotechnology，Leuven University Press，1997)。利用高压力技术制备IBDV疫苗至今尚未见报导。病毒一般是由蛋白质和核酸构成的大分子复合物，其外壳蛋白包含多个亚基，如同寡聚蛋白在高压力下会解离并发生构象漂移，在一定的高压力范围内病毒外壳蛋白亚基也可能解离并发生更加复杂的变化，降低压力后病毒难以恢复天然状态，从而影响到病毒的感染性，另一方面表面抗原(外壳蛋白亚基)的结构和构象又可能不改变，因此免疫原性不受高压力影响(Ruan K.and Weber G.，Biochemistry，1989，28：2144-2153；Silva J.L.et al.，Current Opinion in Structural Biology，1996，6：166-175)。病毒在高压力下的结构和性质变化虽然已有文献报导，但本发明首次将理论与实践相结合，制备出了安全、高效的鸡传染性法氏囊病病毒疫苗。

本发明的目的是提供一种安全、高效的鸡传染性法氏囊病病毒疫苗，该疫苗对雏鸡具有很好的免疫保护作用，它是利用高压力技术处理天然IBDV原材料制得，能够广泛用于预防和控制鸡传染性法氏囊病。

本发明是利用高压力(high hydrostatic pressure)技术制备得到的鸡传染性法氏囊病病毒疫苗。该高压力疫苗经感染性和免疫性能测试证实具有安全、稳定和高效免疫保护等特性。

本发明中IBDV疫苗的高压力制备方法：可通过三种方法取得制备疫苗的IBDV原材料：1.IBDV强毒接种鸡胚成纤维细胞进行增殖，经反复冻融、离心得到病毒培养液；2.将IBDV强毒接种鸡胚绒毛尿囊膜进行增殖，收获绒毛尿囊膜及尿囊液，经匀浆、离心等步骤得到病毒溶液；3.发病鸡法氏囊体经匀浆、生理盐水稀释、反复冻融、离心等步骤后得到病毒溶液。高压力设备是根据Paladini和Weber的设计(Paladini A.A.and Weber G.，Rev.Sci.Instrum.，52：419-427，1981)制造而成，该设备主要由高压力容器和压力发生器组成，使用液体(水、油、乙醇等)为压力传送介质。首先将原材料无气泡密封于耐压的塑料管中(如聚乙烯塑料管)，然后置入高压力容器，并与压力发生器连接。选择适当的压力(800-6000大气压)、温度(0-25℃)及时间(20分钟-6小时)，将原材料进行处理，取出后即成为高压力IBDV疫苗，无需其它后处理过程。压力、温度、时间等条件的选择对于高压力IBDV疫苗的制备十分重要。IBDV疫苗的高压力制备方法简便，周期短，可针对不同血清亚型的IBDV病毒较快地制得相应的疫苗产品。