[发明专利]对羟基苯丙酮酸双加氧酶的植物基因

权利要求书

1 编码植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶的分离核酸片段，该片段包括选自以下的核苷酸序列：

编码包括描述在SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:15中的一条多肽的核苷酸序列和

与SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:14的核苷酸序列基本类似的修饰核苷酸序列，在序列中含有不影响编码蛋白功能特性的缺失、插入或替换。

2 编码植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶的分离核酸片段，该片段含有描述在SEQ ID NO:14的核苷酸序列。

3 含有操纵连接于至少一种合适的调节序列的权利要求1或权利要求2的核酸片段的嵌合基因。

4 权利要求3的嵌合基因，其中至少一个合适的调节序列指导基因在微生物中表达。

5 权利要求3的嵌合基因，其中至少一个合适的调节序列指导基因在植物中表达。

6 包含操纵连接至少一种合适调节序列的权利要求1或权利要求2的核酸片段的质粒载体。

7 包含宿主细胞和权利要求6的质粒载体的转化宿主细胞。

8 权利要求7的转化宿主细胞，其中宿主细胞来自植物或为微生物。

9 权利要求8的转化宿主细胞，其中微生物是大肠杆菌。

10 能耐受与至少一种在非转化植物中抑制对羟基苯丙酮酸双加氧酶反应速率的化合物接触的转化植物，该转化植物含有权利要求3的嵌合基因和宿主植物。

11 权利要求10的转化植物，其中宿主植物是谷类作物。

12 鉴定能抑制对羟基苯丙酮酸双加氧酶反应速率的化合物的方法，包括：

(a)用权利要求6的质粒载体转化宿主细胞；

(b)促进编码植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶的核酸片段的表达；

(c)用一测试化合物接触来自步骤(b)的表达酶；

(d)评估测试化合物抑制对羟基苯丙酮酸双加氧酶反应速率的能力。

13 权利要求12的方法，其中通过测定氧的利用，二氧化碳的释放，尿黑酸的产生，对羟基苯丙酮酸的减少或马来酰乙酰乙酸的产生，来评估测试化合物抑制对羟基苯丙酮酸双加氧酶反应速率的能力。

14 权利要求12的方法，其中转化的宿主细胞是含编码植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶的嵌合基因的大肠杆菌。

15 抑制植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶活性的化合物，该化合物用权利要求14的方法鉴定。

16 使植物耐受至少一种抑制对羟基苯丙酮酸双加氧酶反应速率的化合物的方法，包括：

(a)用包含编码植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶的核酸片段的嵌合基因转化宿主植物细胞，和

(b)表达嵌合基因，其量可以使转化植物基本上耐受至少一种抑制对羟基苯丙酮酸双加氧酶反应速率的化合物。

17 微生物生产活生植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶的方法，包括：

(a)用权利要求4的编码植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶的嵌合基因稳定转化微生物；

(b)促进嵌合基因在合适的时期表达；

(c)回收活性植物对羟基苯丙酮酸双加氧酶。

18 在植物中过量表达对羟基苯丙酮酸双加氧酶的方法，包括：

(a)用一种嵌合DNA分子稳定转化宿主植物细胞，该嵌合DNA分子包含至少一个拷贝在植物细胞中驱动相连的编码序列表达的合适启动子，该启动子与至少一个拷贝的同源或异源对羟基苯丙酮酸双加氧酶编码序列操纵连接；和

(b)使步骤(a)的转化宿主植物细胞生长。

19 权利要求18的方法，其中嵌合DNA分子是权利要求5的嵌合基因。

20 一种分离的核酸片段，包括选自以下的成员：

(a)一种描述在SEQ ID NO:16中的分离核酸片段；

(b)一种基本上类似于描述在SEQ ID NO:16中的分离核酸片段的分离核酸片段；和

(c)一种与(a)或(b)互补的分离核酸片段。