[发明专利]对锥虫物种的免疫

说明书

本发明涉及基因和相应的基因产物(DNA、RNA和蛋白质)，将其用于胞内感染病原体的特异性疫苗和诊断，特别是寄生虫感染，更特别的是锥虫感染，特别是利什曼原虫属物种的感染，更加特别的是诱导皮损伤的利什曼原虫属，更加特别的是Leishmania major。

利什曼原虫是锥虫家族的一个成员，它在美国、非洲和印度次大陆的热带地区以及西南亚的亚热带和地中海地区是地方性流行病。由白蛉传播的原虫利什曼原虫属的不同物种的感染作为自体愈合皮损伤、神经以及心脏失调或者致命的内脏感染出现。由利什曼原虫属造成的疾病一般称作利什曼病。

一些疾病形式是人类的(仅仅在人类之间传播)，而其它的是人畜互传的(包括人贮存器)。已知的利什曼原虫属物种超过20种，其中12种与利什曼病的各种形式相关。

以临床模式为基础，可以将利什曼病分成三类。皮肤利什曼病是最流行的，它引起皮肤溃疡，并且可能超过一年才能治愈。粘膜皮肤利什曼病最初造成类似的损伤，它可以治愈，但是它可能再出现而引起恶性组织破坏，主要是鼻子和口。最后，内脏利什曼病是一种十分严重的系统性疾病，如果未作治疗的话，它几乎总是致命的。

自从1980年中期以来，已经报道，由于在利什曼病的传统地方性流行区域HIV流行的传播机会性利什曼原虫属感染的数量发生了显著的增加。当前世界广泛流行的利什曼病患者有12000万(参见评论Liew和O′Donnell,1993)并且350000万居住在危险区。这种疾病的新患者数量每年1500万中有500000是内脏利什曼病。

内脏利什曼病造成大规模流行病，并且患者的数量在年与年之间的变化很大。在1991年期间，印度和苏丹发生大流行病。仅仅印度患者的数量可能就已经达到250000。在1991年，据估计可能有75000人死于内脏利什曼病。

皮肤利什曼病的影响不太显著，但是它造成的病痛在地方性流行区域中更严重，这是由于与容貌的毁损相联系的社会和心理上的创伤。对地方性流行区域的人们关注的这一重要性反映在利什曼化的老做法中，这牵涉到以利什曼原虫属故意的和冒风险的感染，以便以在身体较少的暴露部分上溃疡与损伤的代价换取诱导终生免疫。

在它们的生活史期间，利什曼原虫属生长在多样化的环境条件中，并且通过明显的发育阶段来区分(参见评论Wilson 1990,Smith等，1994)。在白蛉载体中，它们长成修长的，有鞭毛传染性的前鞭毛体。当白蛉吸血时，它将寄生虫传播到人宿主中，其中它们被皮肤上的巨噬细胞所吞噬。在巨噬细胞溶酶体内，所说的寄生虫分化成圆形的不具鞭毛的无鞭毛体，其中它们进行复制，直到巨噬细胞裂解为止。然后它们释放出来去感染其它巨噬细胞，或者由白蛉接纳，其中它们分化返回到前鞭毛体时期以重复它们的生活史。

利用利什曼原虫属通过天然或故意的感染实现的终生保护表明，对这种疾病的大量接种是切实可行的。在人临床试验中利用整个杀死的寄生虫在对皮肤利什曼病进行接种中已经取得了进展。然而，问题出现了，例如曾在免疫性感染的宿主应答中试剂或变体是非实用性的。此外，用热杀死的、无毒性的或者放射性减毒的前鞭毛体的皮下接种经常是无效的或者不好的，甚至会使损伤恶化。因此，为了避免通过接种恶化天然获得性感染的风险，十分重要的是开发第二代疫苗，例如利用免疫纯化的抗原或者衍生物。