[发明专利]红螺菌制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种微生物制剂，特别是利用红螺菌科菌类的制剂及其制备方法和治疗某些消化道疾病的应用。

目前用于治疗消化道疾病的微生态制剂主要有双岐杆菌、蜡样芽孢杆菌、地衣牙孢杆菌、乳酸杆菌、粪链球菌等，未见应用红螺菌的报道。上述诸菌作为治疗消化道疾病制剂的主要不足是：1．疗效不甚显著，只能作为辅助治疗剂或预防剂。2．单位重量或体积细胞数少，一般仅0.1-2亿/g(ml)。由于细胞生物量小，因而导致疗效不佳。3．保存期短。室温下保存半年，细胞衰亡即过半。液态制剂开盖后仅能保存1-5天。

本发明的目的是提供一种红螺菌科菌类制剂及其制备方法，以及应用该制剂提高治疗某些消化道疾病的疗效，特别是结肠炎的疗效，同时提高该制剂单位重量(体积)细胞数，延长保存期，保证该制剂质量。

本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的：

红螺菌制剂，是用红螺菌科三个属：

红螺菌属(Rhodospirillum)

红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)

红微菌属(Rhodomicrobium)其中的任何一种或几种作为菌种，经一级菌种、二级菌种、三级培养液培养并加入少量食品添加剂而制成的液态制剂和以大米粉、玉米粉、牛奶粉、麸皮、糖、无机盐、微量元素和维生素等为基料接种三级培养液经培养、干燥、粉碎而制成的固态制剂。

上述红螺菌的液态和固态制剂的制备方法和具体操作过程是：

一．液态制剂

1．一级菌种制作：

①培养基：牛肉膏或酵母膏为一组，磷酸二氢钾(K₂H₂PO₄)、硫酸镁(MgSO₄·7H₂O)、乙酸钠(C₂CooNa)、氯化钠(Nacl)为一组，碳酸钠(Na₂CO₃)为一组。

②操作：将三组培养基的各组成份分别化入热的自来水中，高压(0.14MPa)灭菌30秒，冷却后补无菌水至所要求的量，其中各成份在水中的体积百分比为：

牛肉膏或酵母膏0.01％ 磷酸二氢钾0.03-0.05％

硫酸镁0.01％         乙酸钠0.2-0.4％

氯化钠2％             碳酸钠0.1-0.2％然后将三组成份按所需比例混合，在无菌条件下装入经灭菌的50-250ml三角瓶中，无菌条件下接种5％(以下均为体积百分比)的前述菌种，盖上无菌橡皮塞，在28°±2℃自然或白炽灯光(500-2200lux)下培养2-3天，待细胞数达40亿/ml时终止培养，即为一级菌种，保存备用。

2．二级菌种制作：

培养基和操作同一级菌种。不同之处是：①接入一级菌种10％；②培养容器为500ml细口无色玻璃瓶。细胞数达30亿/ml。

3．三级培养液制作：培养基和操作同一级菌种。不同点是：①接入二级菌种20％；②培养容器为1000-5000ml无色玻璃瓶，用玻璃盖封口。要求细胞数达30亿/ml。

4．液态制剂制作：

按照三级培养液100ml，糖精钠0.01g，桔子香精0.001ml的比例，将糖精钠溶于三级培养液中，再加入桔子香精。摇匀、装瓶、封口、包装。

二、固态制剂

1．接种与培养：

将大米粉26％、玉米粉24％、牛奶粉(脱脂)10％、麸皮38％、糖1.8％、无机盐和维生素0.2％的混合物用自来水和匀为基料，在0.14MPa下灭菌一小时，冷却后接种三级培养液(基料：三级培养液=1∶0.5)，装入糖瓷盘中，上覆无菌塑料薄膜，在28°±2℃无菌、500-2700lux自然光或白烘灯光照条件下培养2-3天，待细胞数达80亿/g以上终止培养。

2．干燥：在≤80℃电热鼓风干燥箱中烘干，或冻干、真空干燥。物料含水量≤5％。

3．粉碎：用中药粉碎机粉碎至40目。

4．封装：以胶囊机分装，然后压成铝板，包装。

本发明制剂的主要技术指标：

1．外观及感观指标：

①外观：液态制剂为肉红色粘稠状，固态制剂为深褐色粉末。

②气味：液态制剂稍有二氧化硫气味，固态制剂具有发酵物特殊气味。

③滋味：略带甜、咸味。

2．微生物指标：

细胞总数：液态制剂≥20亿/ml，固态制剂≥80亿/g。