[发明专利]玻璃筛柱快速回收DNA片段的方法

说明书

本发明涉及分子生物学的一项基础实验技术，具体是指进行分子生物学实验时，对凝胶DNA中片段进行回收的一种方法。

在含有各种不同大小片段的DNA混合物中，分离纯化特定分子量的DNA片段是基因工程技术中的基础工作。近些年来，实验室最常采用获取DNA片段的方法是凝胶电泳回收法，其主要是低溶点琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶回收法，其次是DEAE纤维素纸插片电泳法和蔗糖梯度超速离心分离DNA法，这些方法都可以达到DNA片段的回收，但需投入使用的各种试剂较多，操作方法复杂，实验成本高，而且获得DNA的回收率较低，给分子生物实验带来诸多浪费，由于试剂多种，试剂的生产成本不断攀高，有碍于分子生物实验的广泛开展和应用。

本发明的目的是提供一种新的DNA片段回收方法，对传统的DNA片段回收方法进行更新，建立一种试剂使用少，操作简便，实验成本低，DNA回收率高的快速回收方法。根据对几个主要发达国家初步查新检索也未见到利用玻璃筛柱将凝胶冻融快速回收DNA片段的方法。

实现本发明目的的技术方案是利用玻璃筛柱和冻融原理将含有DNA的凝胶物速冻并经高速离心后，使DNA与琼脂糖凝胶分离，DNA从凝胶中流出后经过玻璃筛柱的筛孔得到收集，琼脂糖凝胶却因受热融解成碎块滞留在柱式离心管内。

本发明的技术特点是操作方法简便，需耗的试剂品种和量均较原技术方法减少90％，大幅度降低了试剂生产成本和使用价格，与传统的实验技术回收法相比，可快速地回收到几百bp(200bp以上)——几百kb(10万bp以下)大小不同的DNA片段，回收率在30％-80％之间(根据凝胶的配制浓度)，能较好的获取DNA片段，是分子生物学实验基础中一项有价值和值得推广的实验技术方法。

本发明的详细技术方案说明如下：

一种快速回收DNA片段的方法是将含有DNA片段的凝胶用刀片削切成3-4mm³大小的碎块，置入玻璃筛柱式离心管内，在冰箱-20℃的低温下冷冻30分钟，取出冷冻的玻璃筛柱式离心管套合入1.5ml的Eppendrof式离心管内，套合后的离心管在室温下放置在转速为10.000-12.000rpm的离心机内进行10-15分钟离心，DNA从凝胶中流出经过玻璃筛柱的筛孔收集在1.5ml的Eppendrof离心管内。琼脂糖凝胶却因受热融解成碎块滞留在柱式离心管内，从而达到与DNA分离的目的。将Eppendrof离心管收集得到的DNA片段可用紫外比色法检测DNA浓度，当DNA检测含量较低时，可加入至少2-4倍体积的无水酒精再次置入-20℃的低温冰箱内冷冻30分钟取出，再次在转速为10.000-12.000rpm的离心机内进行离心10分钟，去除上清液，沉淀在管内的DNA用少量TE液溶解，即可得到所需的DNA。

本发明最佳实施方案是按照上述方法使用玻璃筛板柱式离心管，应是去掉吸附层后留下玻璃筛板而制成的离心管。在操作此法确定DNA回收率时，与DNA片段的大小和凝胶的浓度相关，尽量配制低浓度(0.8％)凝胶为最佳，使用此方法不仅能一次分离数种DNA片段，而且能将一定范围内的DNA片段一起回收，对分析利用DNA十分便利。回收后的DNA片段可用作酶切、体外连结、探针标记、测序、PCR、质粒纯化等分析使用。