[发明专利]青海弧菌干粉制剂

说明书

本发明青海弧菌(Vibrio qinghaiensis)干粉制剂属微生物制剂领域。

目前水质对生物毒性的测试有多种方法但简单易行的是采用海洋发光细菌(主要是明亮发光杆菌)进行，如Bulich.A.A在AmericanSociety for Testing and materials，Philadolphia，PA，1979，PP98-106文章中所述的那样，可是，海洋发光菌的发光生理要求比较苛刻，它必须在含3％NaCl，酸度在PH7左右，环境的温度控制在15-25℃之间，在如此的环境中，方能显出它的正常发光本能。但在实际测定中，由于在污染水样中加入3％NaCl后，往往使样品的生物毒性发生改变，使测得结果的可信度降低，这样使海洋发光菌在测试生物毒性中的运用大大地受到限制。

本发明为改变海洋发光菌在测试水质的生物毒性上受到的限制，在实践中发现青海弧菌发光的生理要求比海洋发光菌发光生理要求低，适用范围广的优点(详见朱文杰等，1994年5月，发光细菌一新种-青海弧菌，海洋与湖沼，第25卷，第3期，PP273-279)，并且青海弧菌可制成干粉剂，使之更易保存和应用。

本发明利用在青海湖中裸鲤的体表培养分离而得的发光细菌--青海弧菌，将此青海弧菌制成干粉制剂，其主要技术是将青海弧菌经液体培养至对数期，离心分离收集弧菌体，然后将菌体洗涤干净后，重新悬浮于保护剂溶液中，其保护剂溶液的配方为牛奶1-10％wt，蔗糖或海藻糖1-10％wt，精氨酸0.1-0.5％wt，水为余量。再将菌体的悬浮液分装于安瓿，每瓶1ml，置于冰中使之冻结成固态，然后，取出置于冷冻干燥机上干燥至含水量约5％左右，将安瓿封口，贮于冰箱10℃以下待用。在测试中，首先使青海弧菌干粉制剂加入复苏液A或复苏液B，使其复苏后，对水质的毒性进行测试，其复苏液A为摩尔浓度和酸度分别为0.05-0.2M和PH6.0-9.0的磷酸缓冲液，复苏液B为百分比浓度为0.5-8％葡萄糖液。

青海弧菌在蒸馏水环境中稳定发光一个多小时，在5％NaCl盐液中仍继续生长和发光良好。适应的生长和发光的温度和酸度分别在10-30℃和PH5.5-9.5的范围内。青海弧菌这些生长，发光特性，大大优于海洋发光细菌对生长，发光的环境要求。因此，青海弧菌使用的酸度，温度，盐度的范围更广泛，测定的结果更为可靠。

实施例：

1.将青海弧菌液体培养至对数中期，用3000rpm的离心机离心10分钟，收集菌体，将菌体用蒸馏水洗涤干净后重新悬浮于保护剂溶液，其保护剂溶液为牛奶，海藻糖，精氨酸和水，其浓度分别为8％，4％及0.3％，余量为水，接着将青海弧菌悬浮液分装于安瓿，每瓶为1ml，置于干冰中使其冻结成固态，取出后再放入冷冻干燥机上干燥至含水率为5％左右，置于冰箱10℃以下待用。

在待测样品中加入NaCl，使其盐度为0.5％NaCl，或加入葡萄糖，其浓度为3％左右，然后取出青海弧菌干粉制剂，加入3ml复苏液A于安瓿中，摇匀，静置5min，复苏液A为0.07MPH9.0磷酸缓冲液，将复苏后的青海弧菌50l加至2ml待测样品液中，置于发光光度计上测定发光度，同时作空白液发光度测试对照试验。以发光抑制率依此求得水质毒性的程度。

2.取青海弧菌干粉制剂，经复苏液B处理，复苏液B为2％葡萄糖，的水溶液。在2ml的待测样品中，(含4％的葡萄糖)加入50l复苏液B青海弧菌葡萄液，按实施例1的方法，进行同样的测定，依此求得以重金属污染为主的水质毒性。