[发明专利]复方干扰素抗病毒合剂及其制作技术和用途

说明书

本发明是涉及一类新型复方人重组α2b型干扰素抗病毒合剂，是一种外用生物技术药物，它由大肠杆菌产生的人重组α2b型干扰素，中药黄芪乙醇提取液与保护剂所组成。本发明是基于下列发现：即发现干扰素与黄芪对感冒病毒有明显的协同作用，包括抗鼻病毒39型，14型，副流感仙台病毒等，对抑制滤泡性口腔炎病毒，人乳头瘤病毒16型等的繁殖也有明显的协同作用。本合剂是一种高效，广谱的外周抗病毒制剂，可用于普通感冒，慢性宫颈炎和其他病毒病的预防和防治。

普通感冒是一种极为常见的传染病，约占人类疾病的四分之一，每年每人大约平均得病5-6次。引起感冒的病毒种类很多，主要是鼻病毒，由于鼻病毒型别至少有100型以上，疫苗预防没有可能；但是，目前感冒的治疗大部均为对症治疗，缺乏针对鼻病毒病原的安全有效的预防和治疗方法。

本发明的目的是将作者24年来对黄芪和干扰素的研究成果，特别是发现黄芪与干扰素的协同作用，开发为一种防治常见病的外用药物。

复方干扰素抗病毒合剂的配方为：

              人重组α2b型干扰素  10万单位/毫升

                  (纯度)》20％)

              黄芪乙醇提取液       3毫克/毫升

                (人体使用时可加大黄芪量)

              蛋白，多糖保护剂     2％

重组人α 2b型干扰素抗鼻病毒的有效性：测定干扰素滴度时一般采用对干扰素作用敏感的滤泡性口腔炎病毒(VSV)。抑制VSV在WISH细胞上引起50％病变的干扰素量为1单位；而抑制39型或14型鼻病毒在WI38细胞上引起50％病变的干扰素量为1.34单位；在MRC5细胞上为1.18单位；在2BS细胞上为1.38单位。可见在上述4种系统中，差异都比较接近，鼻病毒与VSV相比，总的敏感性比为I∶1.3＝0.77。这说明，重组人α2b型干扰素对在人二倍体细胞上的抗14，39型鼻病毒的作用是十分有效的，与VSV在WISH细胞上的敏感性相当。

黄芪对重组人α2b型干扰素抗14型，39型鼻病毒的加强作用：首先我们证明0.3％黄芪(黄芪乙醇提取液，2克/毫升)对14型鼻病毒(由美国ATCC提供，在WI38二倍体细胞中传代)无直接的灭活作用。

方法是：先将含0.3％黄芪的细胞培养液与100TCID50的14型鼻病毒混合，对照组为不加黄芪的细胞培养液与同量的病毒混合，均在37℃作用4小时，同时进行效价滴定，33℃培养，结果表明，在WI38二倍体细胞培养上(均由北京生物制品研究所提供，细胞培养液为Eagle′s液，内含10％初生牛血清，0.03％谷氨酰胺；青霉素100U/ml；链霉素100ug/ml；pH7.0-7.4)二者滴度无明显差别，说明0.3％浓度的黄芪对14型鼻病毒无明显的体外直接灭活作用。

用含有0.3％黄芪的细胞培养液来培养2BS，WI38，MRC5(来源与培养方法同上)等人二倍体细胞，在显微镜下未见对细胞有肉眼可见的毒性作用；一般来说，用含黄芪的培养液来培养细胞，其细胞层比较致密。

单纯0.3％黄芪的抗14型鼻病毒的作用是不明显的，但黄芪如与干扰素联合应用则明显地增进干扰素原有的抗病毒作用，即有明显的协同作用。在2BS细胞上，黄芪对干扰素抗14型鼻病毒的增效率为344.5％(黄芪干扰素组的抗病毒效价/单纯干扰素组的抗病毒效价X100％)；在WI38细胞上为166.8％；在MRC细胞上为212.4％。在上述三种细胞上使用黄芪可使干扰素的抗病毒效果平均提高约1.5倍；黄芪对干扰素抗39型鼻病毒的增效率为258.5％。(见附表1，2)。这说明，采用10万单位干扰素与黄芪联合应用可以产生约25万单位干扰素治疗感冒的效果；这与美国1973年进行的志愿者攻击试验的剂量相当，再加上黄芪在机体内的免疫调节作用，效果理当更为明显；如用于预防，剂量还可降低。