[发明专利]抗胃肠疾病的鼻内接种

说明书

发明背景

本发明涉及用于预防和/或治疗胃肠疾病的鼻内接种方法。

艰难梭菌是导致可发展为严重，并且有时为致命的结肠炎的与抗生素相关的腹泻的革兰氏阳性，形成孢子的产毒细菌。在正常的肠菌丛被例如抗生素或抗肿瘤剂治疗所打乱时，艰难梭菌可在结肠中定居，在其中它产生两种高分子量毒素，毒素A和毒素B，这两种多肽均为细胞毒素，但毒素B的效价大于毒素A 1000倍。毒素A还为肠毒素，因为它在被结扎的动物肠袢中导致体液的累积。

发明概述

我们已表明鼻内，和混合粘膜(例如口或鼻内)及全身性(例如及下或腹膜内)，接种方法甚至在缺乏佐剂时在诱导远端粘膜位点(例如胃肠和/或生殖尿道)的粘膜免疫应答中也有效。使用这些方法中的一种用艰难梭菌毒素A或B(或类毒素)接种仓鼠导致保护这些动物免于后来的艰难梭菌的攻击。

因此，本发明涉及一种诱导对哺乳动物中的胃肠或生殖尿道病原体产生远端粘膜免疫应答(即上呼吸道外，例如在胃肠和/或生殖尿道的粘膜免疫应答。在该方法中，非复制的多肽抗原被经鼻内给药于哺乳动物，该多肽抗原被溶解在药学上可接受的稀释剂中，并能诱导对病原体产生远端免疫应答。

本发明还涉及一种在哺乳动物中诱导对病原体产生远端粘膜免疫应答的方法，包括：(1)用一种能诱导对哺乳动物粘膜表面产生远端免疫应答的抗原给药，和(2)用该抗原对哺乳动物进行胃肠外给药。任何顺序的混合粘膜和胃肠外给药均包括在本发明中。例如，粘膜(例如，鼻，口，眼，胃，直肠，阴道，胃肠，或尿道)给药可在胃肠外(例如静脉内，皮下，腹膜内或肌内)给药之前。或者胃肠外给药可位于粘膜给药之前作为实例，可将三周剂量经粘膜给药(例如鼻口)，在第四周时，可进行混合粘膜(例如鼻口)和胃肠外(例如腹膜内)给药。

对其产生粘膜免疫应答的病原体也包括在本发明的方法中，从它可衍生的抗原(例如，非复制的多肽抗原)包括，但不局限于胃肠病原体，例如螺杆菌(幽门螺杆菌、猫螺杆菌和螺杆菌(H.heilmanii)，弯曲杆菌(空肠弯曲杆菌)，导致腹泻和结肠炎的病原体(例如梭菌(例如艰难梭菌，诺氏梭菌，索氏梭菌)，肠产毒性大肠杆菌，志贺氏菌，霍乱弧菌和伤寒沙门氏菌)，和肠尿道病原体(例如人免疫缺陷病毒，单纯疱疹病毒，乳头状瘤病毒，梅毒螺旋体，衣原体和淋病奈瑟氏球菌)。

可用于本发明方法中的抗原的具体实例(例如，非复制的多肽抗原)包括，但不局限于细菌毒素。例如，可使用来自梭菌(例如艰难梭菌，诺氏梭菌，索氏梭菌)，例如艰难梭菌毒素A和/或B类毒素，诺氏梭菌α-毒素(BeHe等，Toxicon29(7)：877-887，1991)，索氏梭菌致死毒素(Beffe等，见上文)和其免疫原性片段和衍生物。用于本发明方法的抗原可通过本领域已知的标准方法来获得，例如从产生中的病原体的培养物中纯化，重组DNA方法和化学合成方法。

本发明可采用梭菌(例如艰难梭菌)类毒素作为疫苗抗原，类毒素是一种经处理以降低毒素的有毒性质，但仍保留了抗原性的毒素(或毒素的混合物，例如，艰难梭菌毒素A和毒素B)。包括在本发明中的类毒素使用标准方法来制备，包括，但不局限于化学(例如甲醛或戊二醛)处理，蛋白酶酶切和重组方法(例如通过产量毒素的片段或突变(例如点突变)。

为了预防或降低未来被病原体感染的机会(即诱导保护性免疫应答)和/或治疗正在经受的感染(即诱导治疗性免疫应答)，可进行本发明的方法，在为肠病原体的情形时，可使用本发明的方法来治疗处于发病危险中，但未患上由病原体(例如艰难梭菌)导致的腹泻的哺乳动物或患有由病原体导致的腹泻的哺乳动物，根据本发明方法，可被治疗的哺乳动物包括如人，如牛，马，猪，狗，猫，绵羊和山羊。

本发明方法的一个优点是对于至少一些病原体(例如艰难梭菌毒素和类毒素)，不需要粘膜佐剂来诱导免疫应答(例如保护性免疫应答)。

通过下面详细描述的优选实施方案和权利要求，本发明的其它特点和优点将会是显而易见的。详细描述

首先描述附图。附图

图1示在通过所示的路径，用艰难梭菌抗原免疫的仓鼠中的抗艰难梭菌疾病的保护水平，显示了在用氯林肯霉素攻击之后，对全身性(死亡)和肠(腹泻)疾病的保护水平。(参见用于描述免疫途径的表1)。