[发明专利]乳房链球菌的CAMP因子

说明书

本发明主要涉及细菌抗原。更特别地，本发明是关于乳房链球菌(S.uberis)CAMP因子的重组生产和CAMP因子在疫苗组合物中的应用。

乳房链球菌是奶牛乳腺炎的重要病因，并与约20％的所有乳腺炎临床病例有关(Bramley，A.J.和Dodd，F.H.(1984)乳品研究杂志(J.Dairy Res.)51：481-512；Bramley，A.J.(1987)动物健康营养(Animal HealthNutrition)42：12-16；Watts，J.L.(1988)乳品科学杂志(J.Dairy Sci.)71：1616-1624)。因为在治疗乳房链球菌乳腺炎中抗菌剂治疗基本无效，控制方法的发展必须以对参与攻击和保护乳腺的毒力因子和保护性抗原的了解为基础(Collins等(1988)乳品研究杂志55：25-32；Leigh等(1990)兽医科学研究(Res.Vet.Sci.)49：85-87；Marshall等(1986)乳品研究杂志53：507-514)。

已知一些乳房链球菌株可产生透明质酸囊(Hill，A.W.(1988)兽医科学研究45：400-404)，透明质酸酶(Schaufuss等(1989)Zentralbl.Bakteriol.Ser.A271：46-53)，类R蛋白(Groschup，M.H.和Timoney，J.F.(1993)兽医科学研究54：124-126)，和共溶血素，即CAMP因子，也被称为UBERIS因子(Skalka，B.和Smola，J.(1981)Zentralbl.Bakteriol.Ser.A 249：190-194)。但是对他们的致病作用知之甚少。

CAMP因子的作用首先由Christie等在1944年所描述(Christie等(1944)澳大利亚实验生物医学科学杂志(Aus.J.Exp.Biol.Med.Sci.)22：197-200)。这些作者发现B组链球菌(GBS)如无乳链球菌，当生长在金黄色葡萄球菌β-毒素(鞘磷脂酶)扩散带旁时，产生完全溶血的明显带，这种现象称为CAMP反应并且该反应中的化合物被称为CAMP因子，它是一种分子量为23,500Da的胞外蛋白(Bernheimer等(1979)感染免疫(Infect.Immun.)23：838-844)。随后从如无乳链球菌中纯化了CAMP因子，被鉴定为25,000Da蛋白质，等电点(PI)为8.9(Jurgens等(1985)色谱学杂志(J.Chrom.)348：363-370)。无乳链球菌CAMP因子的氨基酸序列由Ruhlmann等测定(Ruhlmann等(1988)FEBS Lett 235：262-266)。

CAMP反应的机制已有描述。见如，Bernheimer等(1979)感染免疫23：838-844；Sterzik等在Alouf等编著的《细菌蛋白质毒素》一书中的“来自无乳链球菌的CAMP因子与人工膜的相互作用”，伦敦：学术出版公司，1984；195-196；Sterzik等(1985)Zentralbl.Bakteriol.Mikrrobiol.HYG.Abt.1 Suppl.15：101-108；Fehrenbach等在Fehrenbach等编著的《细菌蛋白质毒素》一书中的“CAMP-因子在毒力上的作用”，Stuttgart：GustavFischer Verlag，1988；351-357；Fehrenbach等在Alouf等编著的《细菌蛋白质毒素》一书中的“两亲性细菌多聚肽与人工膜的相互作用”，伦敦：学术出版公司，1984；317-324。

CAMP因子对各种靶细胞包括绵羊和牛红细胞及其中膜磷脂和鞘磷脂已由磷脂酶和鞘磷脂酶水解的人工膜有裂解活性。

CAMP因子在致病性中的作用还不清楚。部分纯化的来自无乳链球菌的CAMP因子静脉内注射兔子显示出致死性(Skalka，B.和Smola，J.(1981)Zentralbl.Bakteriol.Ser.A 249：190-194)。而且，小鼠腹腔内注射纯化的CAMP因子显著地提高了亚致死剂量的B组链球菌的致病性(Fehrenbach等“CAMP-因子(蛋白B)在毒力上的作用，”收在Fehrenbach等编著的《细菌蛋白质毒素》一书中，Stuttgart：Gustav Fischerverlag，1988；351-357)。另外，与金黄色葡萄球菌的蛋白A一样，GBS CAMP因子可以结合在免疫球蛋白的Fc段并因此被称为蛋白B(Jürgens等(1987)实验医学杂志(J.Exp.Med.)165：720-732)。