[发明专利]鸡贫血症病毒的中和构象表位

说明书

发明简述

本发明提供了CAV蛋白VP1的中和构象表位的形成和鉴定，其是在免疫动物中引发保护性免疫应答所需的。

具体地，本发明描述了抗CAV中和抗体的产生，在一基于这些所产生的中和抗体的诊断试验中检测了CAV(颗粒)。

公开了各种抗CAV疫苗载体，所有这些疫苗均比CAV的致病性要低，所有这些疫苗载体均显示能产生所需的CAV的中和构象表位。

一种载体提供了基于在同一细胞中同时表达VP1和VP2的重组杆状病毒的亚单位疫苗。第二种疫苗是活表达载体，其包括稳定携带VP1和VP2编码序列的Marek氏症载体。第三种CAV疫苗包括遗传学减毒的CAV毒株，其具有降低的致细胞病变效应。

发明背景

鸡贫血症病毒(CAV)是一种独特的小病毒，其颗粒直径为23-25nm，基因组由环状单链(负链)DNA组成(Gelder blom et al.，1989，Northern et al.，1991 and Todd et al.，1990)。这一DNA在感染细胞中通过一种环状双链复制中间体进行扩增，其最近已被克隆并全部测序。CAV基因组长度为2319个核苷酸(Noteborn and De Boer，1990)，对从不同大陆分离的CAV毒株的DNA分析表明在不同分离物之间仅有微小差异(Meehan et al.，1992；保藏号M81223，Claessens et al.，1991；D10068，Kato et al.，1995；D3 1965和Pallister etal.，1994，Soine et al.，1993和1994；L14767)。最近，基于其基因组结构已将CAV归类于环状病毒科的新病毒家族。然而，CAV与这一病毒家族的其它成员之间不相关，这一家族由动物单链环状DNA病毒组成，如猪环状病毒和鹦鹉嘴羽病(beak-and-feather-disease)病毒(Noteborn and Koch，1995)。

CAV基因组含有一明显的启动子/增强子区(Noteborn et al.1994)，其调节CAV转录，CAV基因组的主要转录物是约2100个核苷酸的未剪接多顺反子mRNA，其编码分子量为51.6kDa(VP1)、24.0kDa(VP2)和13.3kDa(VP3或细胞编程死亡蛋白(apoptin))的三种蛋白质(Noteborn and Koch，1995，Noteborn et al.1992，Phenix et al，1994)。所有三种预期的CAV蛋白在CAV感染的细胞中均有合成(Noteborn and Koch，1995)。用在相同细胞中同时合成的(重组)VPl和VP2免疫接种能引发保护性应答，并可用作抗鸡感染性贫血的亚单位疫苗(Koch et al.，1995和Noteborn and Koch，1994c)。

CAV在鸡中能导致临床和非临床疾病，并已知是世界范围的重要禽类病原体(McIlroy et al.，1992和McNulty et al.，1991)。几日龄的小鸡特别易受CAV感染。在这些动物嗜睡症中，观察到在用CAV接种10天后出现厌食和贫血，感染后死亡率最大可增加至50％。随着年龄的增加，抗性也增加(Jeurissen et al.，1992)。在1-3日龄时被CAV感染的鸡的血细胞比容值下降。1-21日龄的鸡感染CAV会导致特别是胸腺皮质耗竭。然而年龄稍大的鸡可以无临床症状地繁殖，年龄稍大的鸡中的CAV感染可以通过血清转变的发生来确定。

皮质胸腺细胞的耗竭被认为能导致免疫缺陷，因而增加了同时感染并导致免疫失败(Noteborn and Koch，1995)。胸腺细胞以及可能还有成红细胞样细胞的耗竭通过CAV诱导的细胞编程性死亡而发生(Jeurissen et al.，1992a)。CAV编码的细胞编程死亡蛋白是这一现象的主要诱导物(Noteborn et al，1994)。

已发现母体抗体能给予抗CAV感染的重要保护，Vielitz等人(1991)报道接触过CAV的母鸡会产生大量抗体，并传给每个卵孵出的小鸡，这些抗体保护鸡不受感染性贫血相关疾病的侵害。在用如下细胞的裂解物接种的母鸡下的蛋的蛋黄中检测到CAV中和抗体，所述的细胞已用CAV重组杆状病毒共感染并产生所有三种CAV蛋白，或者主要产生VP1和VP2。在用CAV攻击的由这些蛋孵出的子代中未显出特异的临床症状(Koch et al.，1995)。