[发明专利]衣原体疫苗

说明书

本发明涉及一种抗衣原体感染的疫苗配方，尤其涉及一种含有重组MOMP且以QS21和3D-MPL为佐剂的配方。

专性的胞内细菌沙眼衣原体感染结膜和泌尿生殖道的粘膜上皮细胞，造成多种人类疾患如沙眼和生殖器的各种感染，而后者能够导致长期的后遗症。沙眼流行于若干个发展中国家，是引起可预防性失明的首要原因；生殖器感染的病例在美国每年约有三百万起，其能使每年有200,000个妇女因衣原体感染的输卵管炎而丧失生育能力(1)。因此，这种病原体是影响公众健康的重大问题，致力于建立一种抗人类衣原体感染的疫苗的努力就显得十分必要。

在人类和非人类灵长类动物身上的疫苗实验表明，以完整的生物体作为免疫原能产生血清种-特异的保护，但是有些这样的疫苗在再次感染时往往产生严重的反应(2)。一些研究证明，衣原体感染从病理学角度上讲是受免疫介导的(3)。此外，纯化的衣原体57KDa(Hsp60)会引起和事先感染的动物的再次感染相似的病理特征(4，5)。基于以上的发现可以得出这样的结论：仅使用一种亚单位疫苗就可以达到预防沙眼衣原体感染的目的。

沙眼衣原体的种类可分成15个血清型，它们又分属于3个血清群：B复合体(包括血清型B、Ba、D、E、L₁和L₂)，中间复合体(血清型F、G、K和L₃)和C复合体(血清型A、C、H、I和J)(6)。性病(STD)是由横跨3个血清群的血清型D到K引起。因此，抗衣原体性病(STD)的亚单位疫苗应当能够抵抗多种血清型(它们或多或少有一定抗原相关性)。

在设计亚单位疫苗的时候，更多的兴趣是集中在存在于一种40KDa的主要外膜蛋白(MOMP)中的血清型抗原上。这种外膜蛋白在体外实验中有孔素(porin)功能(7)，存在于细菌的整个生命周期中(8)；该主要的表面蛋白在人和动物体内具有极高的免疫原性。该MOMP有4个可变区(VD)，外围由五个在各种血清型中高度保守的恒定区包围(9，10)。在体内和体外，中和B细胞的抗原决定簇已被定位在可变区(VD)(11，12，13，14，15)上，而T细胞的抗原决定簇既可位于可变区也可位于恒定区(16，17)。已有不同的科学家将重组的外膜蛋白(MOMP)在大肠杆菌中表达(19，20)。但是manning等人指出他们获得的重组蛋白不能和识别一种构象MOMP抗原决定簇的单抗反应(18)。

在多种动物模型中，用重组的或纯化的MOMP免疫动物，接着用同型或异型衣原体攻击动物，结果对感染参数有不同的影响(21，22，23)。在小鼠上建立了一个非常好的输卵管炎的实验模型。在此模型里，在小鼠子宫内接种人类沙眼衣原体导致了长期不孕(24，25)。在异型攻击实验中，Tuffrey等人发现用铝胶吸附的rMOMP非肠道和粘膜免疫分别降低了输卵管炎的严重性和下生殖道移地发育的持续时间。但是，该制剂对感染引起不育没有保护作用(23)。

细胞免疫和体液免疫似乎对沙眼衣原体造成的生殖器病变均有保护意义。但是，Rank研究小组指出在小鼠体内T细胞介导的免疫是控制衣原体生殖器疾病的主要免疫机制(26，27，28)，而且也发现CD₄和CD₈阳性的T细胞在体内对抗衣原体的免疫反应有作用(29，30)。

3脱-O-酰基单磷酰类脂A见于GB2 220 221(Ribi)。从化学组成上讲，它是由3-脱酰基单磷酰类脂A和4，5或6酰基化链的混合物且是由Ribi免疫化学蒙大拿公司制造。

QS21是由HPLC纯化的皂苷的非毒性组分。这种皂苷来源于南美Quillaja saponaria molina树的皮，它的提取纯化方法见于美国专利No.5,057,540。包含QS21和3D-MPL的疫苗公开于国际专利申请No.WO94/PP153。

本发明首次提供了一种能有效地预防衣原体感染所致的不孕的疫苗组合物。

相应地，本发明提供了包括3D-MPL，QS21和来源于衣原体的MOMP的疫苗配方。特别地，该疫苗含有来源于B复合体血清群的衣原体的MOMP。优选地，该疫苗至少含有一种来源于L₂血清型的MOMP，但还可以含有来源于其他血清型如D和E的抗原。

在一个优选的实施例中，QS21和甾醇一起提供。研究表明这样的组合物不仅降低了反应原性而且提高了QS21对碱介导的水解的稳定性。