[发明专利]碱性纤维素酶及其产生方法

说明书

发明背景

A.技术领域

本发明涉及新的纤维素酶组合物。本发明还涉及优选地来源于Bacillus sp.的新的纤维素酶组合物。本发明还涉及该新的纤维素酶在本领域认为其中添加进纤维素酶是有利的组合物中的用途，包括在洗涤组合物中、在含有纤维的纤维素的处理中、在纸浆和纸张处理中以及在用于产生高果糖的玉米糖浆或乙醇的淀粉的处理中用作添加剂。

B.现有技术的状况

纤维素酶是一种能够水解纤维素中的1，4-β-D-糖苷键的酶。习惯上已把纤维素分解酶分为三个主要的类别：内切葡聚糖酶，外切葡聚糖酶或纤维二糖水解酶(cellobiohydrolases)以及β-葡糖苷酶(Knowles，J.等人，(1987)，TIBTECH 5，255-261)；并且已知可以通过许多细菌，酵母和真菌来产生上述酶。

在已针对纤维素分解酶的应用而研制的申请中主要是那些涉及将(木材)纤维素纸浆降解为用于(生物)乙醇产生的糖、类似于“石洗”和“生物磨光”的织物处理以及在洗涤组合物中的申请。因此已知纤维素酶可以用在洗涤组合物中用于除去污物，即去污。例如英国申请2,075,028、2,095,275和2,097,826表明当洗涤剂中掺入纤维素酶时可以改善去污效能。此外，英国申请1,358,599表明在洗涤剂中纤维素酶的使用可以降低含有纤维的棉布的粗糙度。

在处理织物中纤维素酶的另一个有用的特征为其通过使用过的纤维的颜色更富活力(vibrant)来恢复该纤维的能力。例如，含有纤维的棉布的反复洗涤会给纤维带来灰色的外观，而这被认为是由于由机械作用引起的破坏的和混乱的小纤维，有时称作“起球”造成的。这种带灰色的外观在着色纤维上特别引人注目。因此，纤维素酶除去纤维混乱的顶层并从而改善其整体外观的能力便十分有价值了。

尽管在现有技术中存在涉及许多具有上述的一些或者所有性质的纤维素酶组合物的知识，但仍然继续需要具有改变光谱特性的新的纤维素酶，而该纤维素酶在例如处理织物、用作洗涤组合物的一个成分、处理纸浆和纸张以及在生物质的转变中是十分有用的。申请人已经公开了具有该补充特性以及在纤维素酶的已知应用中有用的某些纤维素酶。

发明概述

本发明的一个目的是提供一种具有用于洗涤剂、处理织物和纸浆与纸张产生的有益性质的新的纤维素酶。

按照本发明，纤维素酶或者该纤维素酶的衍生物可以从Bacillus sp.CBS 670.93中得到或者来源于该菌株。CBS 670.93于1993年12月23日保藏在荷兰Baarn的真菌菌种保藏中心(CBS)，其保藏号为CBS 670.93。优选地，该新的纤维素酶含有按照图2的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)，或者与上述序列具有大于89％的序列相同性，优选地具有至少95％的序列相同性的其衍生物。本发明也涉及一种含有按照图2的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)的新的纤维素酶或与上述序列具有大于92.5％的序列相似性，优选地具有大于97％的序列相似性的其衍生物。

按照本发明的另一个实施方案则提供了一种含有编码按照图2的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)或其衍生物之DNA的组合物，所述衍生物与所述序列具有大于89％的序列相同性、优选地具有大于95％的序列相同性。另一方面，本发明提供了一种含有编码按照图2的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)或其衍生物之DNA的组合物，所述衍生物与所述序列具有大于92.5％的序列相似性、优选地具有大于97％的序列相似性。

按照本发明的再一个实施方案提供了一种用编码按照本发明的氨基酸序列的DNA来转化合适的微生物的方法。此外也提供了用按照本发明的DNA转化的微生物。

在本发明的一个特别优选的实施方案中，纤维素酶为一种从Bacillussp. CBS 670.93中得到的纤维素酶，其计算分子量大约为50kD。该大约50kD的纤维素酶其计算的等电点大约为4，在CMC上的最佳pH值在40℃下大约为6-10、在60℃下大约为7。

附图简要说明

图1表明在40℃和60℃下从CBS 670.93得到的大约50kD的纤维素酶的pH活性概况。

图2表明从CBS670.93得到的50kD纤维素酶的DNA序列(SEQ ID NO：1)以及推定的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)，其中前导肽序列的下面划有横线，分泌时该前导序列被切割掉生成成熟酶。

发明详述