[发明专利]一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法

说明书

本发明涉及一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法

在基因的结构与功能的研究中，DNA限制性敏切片段的分离，常常是借助于琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳来完成的，但分离后的DNA限制片段的回收则是一个比较困难而又关键的问题。

从凝胶中回收DNA片段的方法很多，象冻挤法，机械破碎法、SOS溶液浸出法，羟基磷灰石(HPA)吸附法，电泳洗脱法，低触点mgatosl法，夹心或OE-81低电洗脱法、电洗脱杯法等，其结果均不很理想，主要存在的问题是：1、对DNA分子，特别是较大的DNA分子常常有不同程度的损伤，2、回收率低，3、回收的DNA溶液杂质较多，特别是琼脂碎块夹带过多，影响进一步的实验工作。低触点agatosl法需低触点琼脂，价格较高，并且需从国外进口，应受到限制。夹心式OE-81低电泳洗脂法回收率在60-80％，但每次处理的样品较少，针对现存在的问题，本发明研制了一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法。

本发明目的在于，研制的一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法，它是在回收装置中进行的，分别在回收装置上的粗口处和漏斗形口处用透析膜包住，然后从粗口顶端上口处加入挤碎胶块，并在漏斗形口顶端上口处吸出电泳缓冲液，最后小心吸出剩余部分溶液100vl，用酒精沉淀即可得到纯DNA片段溶液，该装置简单，体积小，可在一个电泳槽内安置多个回收装置进行多个DNA片段回收，采用该装置和该方法回收的DNA回收率在80％以上。

本发明所述的一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段方法，它是在回收装置中进行，其主要是回收装置为“”型，其一端为粗口(1)，另一端为漏斗形口(2)，并在粗口(1)与漏斗形口(2)顶端开有上口(3)(4)；回收方法为：首先将回收装置粗口(1)，漏斗形口(2)的下端开口处分别用透析膜包住，用固定绳或橡皮筋扎紧，然后从粗口(1)顶端上口(3)处加入挤碎胶块；盖上尼龙网；再从漏斗口(2)顶端上口(4)处加入十分之一浓度的电泳缓冲液，然后在粗口(1)处插入负极电泳槽，在漏斗形口(2)处插入正极电泳槽，在电泳槽中注入电泳缓冲液，使其正好盖住透析膜，200V电泳4-5小时，电泳结束后，从漏斗形口(2)顶端上口(4)处吸出缓冲液，最后小心吸出剩余部分溶液100Vl，再用酒精沉淀即可得到纯DNA片段溶液。本发明由于借助于重力作用，防止了小的琼脂碎块进入回收溶液，提高了回收DNA的质量，同时处理样品的范围较宽，从一片段至几十片段均可。

参见附图

图1为本发明回收装置示意图

以下结合附图并给出实施例

本发明所述的一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段方法，它是在回收装置中进行，该回收装置为“”型，其一端为粗口，另一端为漏斗形口，在粗口与漏斗口顶端开有上口，利用该装置回收DNA的方法为：首先将回收装置粗口与漏斗形口的下端开口处分别用透析膜包住，采用固定绳或橡皮筋扎紧，然后从粗口顶端上口处加入挤碎胶块，盖上尼龙网；再从漏斗口顶端上口处加入十分之一浓度的电泳缓冲液，然后在粗口处插入负极电泳槽，在漏斗形口处插入正极电泳槽，在电泳槽中注入电泳缓冲液，使其正好盖住透析膜，200V电泳4-5小时，电泳结束后，从漏斗形口顶端上口处吸出缓冲液，当缓冲液距底部透析膜1-1.5cm停止，小心吸出最后剩余部分溶液100Vl，即为回收DNA片段溶液，再用酒精沉淀即可得到纯DNA片段溶液。