[发明专利]蚯蚓纤溶酶的制取方法

说明书

本发明涉及一种蚯蚓纤溶酶的制取方法。

已往制取蚯蚓纤溶酶的方法，如中国专利申请号为88101579.2的方法，均须采取冰冻干燥、凝胶电泳、离子交换、透析、层析等高成本的生物化学手段，生产设备投资昂贵，生产工艺复杂，从而使得蚯蚓纤溶酶很昂贵。市场上出现的药品博洛克、普恩复口服胶囊，也是应用蚯蚓纤溶酶制取的防治血栓疾病的药品，虽效果较好，但价格昂贵、产量有限，难以满足市场的需求。

本发明的目的在于提供一种制造工艺简单、产品收率高、生产成本低的蚯蚓纤溶酶的制取方法。

本发明的目的是这样实现的：利用肠溶胶囊可进入肠道吸收消化这一特点，避开已有技术为分离纯化而采用的一系列高成本的生物化学手段，选用适用的常规生物化学手段，重点是突破了提取液的配制，能够有效地提制蚯蚓体中的纤溶酶。

蚯蚓纤溶酶本身是一种活性较高的蛋白水解酶，能直接水解纤维蛋白，而人体血管内的血栓就是纤维蛋白组成的，所以蚯蚓纤溶酶具有防治血栓的作用；同时，它还能将人体中的纤维蛋白溶酶原激活成纤维蛋白溶酶，从而进一步增强了对纤维蛋白的水解作用。

本发明的实验表明，不同的提取液对产品收率有显著的影响，对产品的活性也有一定的影响，以往的提制方法往往是先将蚯蚓匀浆，加入提取液，提取液采用盐液或缓冲液，提取时间长达2-3天，因匀浆过滤流失很多活性物质，故产品收率低，活性也不够高。本发明的要点在于以洁净的水为提取液，既不需要除盐，提取时间仅需一昼夜，活性物质收率高，产品活性也高。酶粉的收率可达2-3％，溶纤活力大于12000国际单位/g，经测定该酶的分子量在30000道尔顿左右。

本发明的具体制法如下：

1、蚓体净化：将蚯蚓备料洗净。

2、提制：用蒸馏水加防腐剂苯甲酸钠，直接加入洗净的5000g无毒饵饲料人工养殖的鲜蚯蚓或洗净解冻的蚯蚓，其适量百分比为：蚯蚓∶水∶苯甲酸钠＝1∶0.2-1∶1‰-3‰，置于恒温箱内，在20-50℃下保温提取，温度过高则酶活性易遭破坏，温度过低蚯蚓又难于自溶，约24小时后全部蚯蚓即可自溶，比以往的方法省工、省时、自溶更好、收率更高。防腐剂也可以使用山梨醇。

3、分离：将蚯蚓自溶液过滤，除去残渣、杂物、将滤液离心15-20分钟，转速为每分钟3000-4000转，保留上清液，弃去浆状沉淀物。

4、沉淀：将上述上清液加入95％的医用酒精，用比重计测试，将浓度调整到50-85％，静置沉淀12小时，虹吸出上清液(可回收其中洒精再用)，将沉淀物加丙酮脱水，搅匀后再离心，除去上清液(可回收其中丙酮再用)，将沉淀物加乙醚脱脂，乙醚挥发后，最后剩下的浅褐色沉淀物进入下道工序。

5、干燥：将上述脱水，脱脂后的浆状沉淀物置于搪瓷盆中摊开，放入真空干燥箱中，在室温条件下抽真空约35-45分钟，盆中沉淀物颜色变浅、干燥、取出磨细，用80-100目筛网过筛，即获得蚯蚓纤溶酶粉状产品。经检测分子量约30000，溶纤活力大于10000IU/g。

6、配制胶囊：用酶粉1Kg加可溶性淀粉8Kg，可装制口服胶囊30000粒，每粒胶囊含纤溶酶300国际活性单位以上。

本发明的产品是易溶于水的浅褐色粉末或类白色粉末，适于配制肠溶片剂或肠溶胶囊，具有防治栓塞性心脑血管疾病的效果。采用本发明的方法，可以方便、经济、有效地从蚯蚓体内分离出蚯蚓纤溶酶，使以往昂贵的防治血栓疾病药品得以大批量生产，为人类造福。

下面提供提取液的三个实施例。

实施例1：蚯蚓5000g，水1500ml，苯钾酸钠35g。

实施例2：蚯蚓5000g，蒸馏水2000ml，苯钾酸钠45g。

实施例3：蚯蚓5000g，温开水3000ml，山梨醇50g。