[发明专利]流式细胞仪用标准液

说明书

技术领域

本发明涉及在流式细胞仪的精度控制以及校准中使用的标准液。更详细地是涉及分析尿中的细胞的流式细胞仪用标准液。

背景技术

为把血液中的细胞和尿中的粒子分类计数，已知有使用流式细胞仪的方法。这种方法就是用染色液将样品试样中的细胞染色后使细胞一个个地在流动池中流动，再用激发光照射被染色的细胞，通过测定从细胞上发出的萤光和散射光进行分类计数。

然而，使用流式细胞仪进行分析时，为获得正确的数据必须要事先校准装置。一般地，将被固定化后的红细胞、细菌等细胞、胶乳粒子、萤光粒子等用于流式细胞仪的精度控制以及校准。例如，在特开平6-102152号中记载了使用离子交换树脂的流动式粒子图像解析装置用标准液。另外，在特开平4-278460号中记载了将细胞、菌体、胶乳粒子、微囊、淀粉粒子、明胶粒子、花粉作为标记粒子使用。

但是，由细胞和菌体等生物得到的材料，存在着采集样品的个体差异，很难提供稳定的品质。另外，感染病原菌的危险性以及冷藏保存等处理非常麻烦复杂。

因为胶乳粒子一般不可能被染色，所以不能进行染色液的管理。另外，结合有萤光色素的萤光粒子可以进行光学系统的管理，但不能进行染色系统的管理(不仅是染色液本身的管理，还有染色液的分注量的管理以及温度管理等染色条件的管理)。而且，微囊、淀粉粒子、明胶粒子等表现出与作为测定对象的细胞不同的染色状态，可以认为这是由于这些粒子在与染色液中的色素的亲合性这一点上同实际的细胞之间存在差别的缘故。作为校准用物质，具有同作为测定对象的细胞几乎完全相同的行为的物质可以使校准和精度控制容易进行。

另外，上述特开平6-102152号是关于将粒子图像摄影，然后从每个粒子图像分析粒子的装置中所用的标准液，而不是关于分析散射光强度及萤光强度的装置所用的标准液。

发明内容

本发明克服了上述先有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种具有同作为测定对象的细胞几乎完全相同的行为、且无感染的危险性、使用简便的流式细胞仪用标准液。

为达到上述目的，本发明的发明者们进行了深入的研究，成功地开发出了不采用由生物得到的材料的、可被染色液染色的、并含有与测定对象具有相同行为的粒子的标准液。

也就是说本发明提供了一种流式细胞仪用标准液，其特征在于含有染色后能显示同作为测定对象的细胞几乎完全相同的萤光强度及散射光强度的粒子。

作为测定对象的样品试样是血液、尿液等体液。作为这些体液的成分，例如在血液中含有红细胞、白细胞、血小板等，在尿液中含有红细胞、白细胞、上皮细胞、柱状细胞等。另外，在尿液中还含有由于局部感染或全身感染而带来的细菌、真菌、病原虫、寄生虫等微生物，在肾衰时还会含有由化学物质、药物或游离的脂肪形成的结晶。这些成分就是作为本发明测定对象的细胞。

本发明的标准液中含有染色后能显示同作为测定对象的细胞几乎完全相同的萤光强度及散射光强度的粒子。本发明的标准液中使用的粒子要选择能够吸附一定量的色素的粒子，该一定量的色素是指能够获得与作为测定对象的细胞同程度的萤光强度。

另外，关于粒子大小，可以使用同作为测定对象的细胞相同程度大小的粒子，但因散射光强度不仅反映粒子大小，而且也反映粒子的表面状态，所以未必要使用同样大小的粒子。

如果在本发明的标准液中进一步添加萤光灵敏度稳定剂，则可长时间防止保存时粒子染色状态的变化即萤光灵敏度的变化，因而使用非常方便。即使在没有萤光灵敏度稳定剂的情况下，室温下粒子的染色状态也可稳定3个月左右，但添加稳定剂后会更加稳定(例如，室温下可保存8个月以上)。

作为萤光稳定剂，最好是水溶性有机溶剂，例如醇类、二醇类较适合。具体可以使用甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、二乙二醇等，优选使用乙醇。使用浓度优选在5～15w/w％范围内，更优选6-14w/w％。另外，通过添加这些物质，还可以起到抑制杂菌繁殖的作用。

本发明的标准液中使用的粒子优选是球状硅石粒子，特别优选液晶隔板(spacer)用硅石。另外，作为液相色谱仪中使用的充填剂的粒子也适用于本发明的标准液，特别优选交联琼脂糖及多孔性硅石。

例如，以尿中出现的细胞为例，将对于各细胞的优选粒子详细说明如下。红细胞：

粒径3-15μm、优选5-10μm的高纯度硅石的球状粒子较为合适。特别优选作为液晶隔板这样的电子材料使用的物质。例如可以使用宇部日东化成(株)制的HIPRESICA sp^TM(平均粒径5.1μm)。白细胞：