[发明专利]分析人类基因组短串联重复顺序多态性的电泳系统

说明书

本发明涉及一种分析人类基因组短串联重复顺序多态性的电泳系统，它属于用电泳法测试的材料。

目前，人类基因组遗传连锁分析、疾病基因分析、染色体图分析及法医学个人识别与亲权鉴定，大多都采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增所检血样中DNA中短串联重复顺序后，用聚丙烯酰胺测序胶电泳分析法对其进行检测分析。在这种方法中使用的测序胶尺寸大(为400mm×300mm×0.5mm)，不便于工业化成批生产，因此在检测中，制胶工作量大，电泳及染色操作复杂，不便于临床医学及法医学常规检验。为了解决上述难题，1995年，Buzas，Z.及Varga，L.用Wlltfang，J.等人创建的分析蛋白质-SDS复合物的微型胶多相电泳缓冲系统对DNA片段长度多态性进行了分析。该电泳系统可使DNA片段按其片段大小加以分离，同时亦可区分出扩增产物主带与附加带，然而在其电泳系统中220bp至75bp之间的相对迁移率为39～40％ (见图1中的c5％、T8％曲线)。因此，该系统也难以在有限的微型胶上有效地分离人类基因组短串联重复顺序。

本发明的目的是提供一种能扩大聚合酶链反应技术所扩增的短串联重复顺序产物的相对分离距离，获得清晰、可靠的分型结果的分析人类基因组短串联重复顺序多态性的电泳系统。

为完成上述任务，本发明采取的技术方案是：该电泳系统由聚丙烯酰胺微型胶与电极缓冲液组成，聚丙烯酰胺微型胶由分离区和成层区构成，分离区在胶浓度T为8％、交联度C为6.5～8％的情况下，由丙烯酰胺、NN′-次甲基双丙烯酰胺、双蒸馏水、三羟甲基氨基甲烷0.4摩尔、硫酸0.1摩尔、甘油0.87摩尔、四甲基乙二胺8.6毫摩尔和过硫酸铵1.75毫摩尔组成，该分离区的PH值为8.1；成层区在胶浓度T为5％、交联度C为2.6％的情况下，由丙烯酰胺、NN′-次甲基双丙烯酰胺、双蒸馏水、双[2-羟乙基]亚氨基三羟甲基氨基甲烷(Blstrls)0.4摩尔、硫酸0.1摩尔、甘油0.87摩尔、四甲基乙二胺8.6毫摩尔和过硫酸铵1.75毫摩尔组成，该成层区的PH值为6.7；前述丙烯酰胺、NN′-次甲基双丙烯酰胺的重量和双蒸馏水的容量由胶浓度T和交联度C的计算公式确定；电极缓冲液为正极缓冲液和负极缓冲液，正极缓冲液由三羟甲基氨基甲烷0.4摩尔、硫酸0.1摩尔组成，该PH值为8.1；负极缓冲液由NN′-双[2-羟乙基]甘氨酸(Blc-lne) 0.4摩尔，氢氧化钠0.1摩尔组成，该PH值为8.2。

上述聚丙烯酰胺微型胶的尺寸为50×45×0.5mm，其中分离区为37mm，成层区为13mm。

本发明由于采用了上述技术方案，因此与背景技术相比，具有下列优点：

1、能扩大聚合酶链反应技术所扩增的短串联重复顺序产物的相对分离距离，能获得清晰、可靠的分型结果，并且检测速度快，特别适合于基层法院物证及临床医学常规检验；

2、聚丙烯酰胺微型胶的尺寸小，有利于成批生产并且运输和保存方便；

3、聚丙烯酰胺微型胶的制作成本低，只为测序胶的十五分之一；

4、检测时间缩短，整个检测过程可在2.5小时内完成；

5、所需检测样品少，只需0.2～0.5μl。